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小鼠琥珀酸脫氫酶(SDH)酶聯免疫試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                                                                       96T

7μmol/L -260μmol/L

使用目的：

本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關液體樣本中琥珀酸脫氫酶(SDH)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠琥珀酸脫氫酶(SDH)水平。用純化的小鼠琥 珀酸脫氫酶(SDH)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入琥珀酸脫 氫酶(SDH)，再與 HRP 標記的琥珀酸脫氫酶(SDH)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合 物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作 用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的琥珀酸脫氫酶(SDH)呈正相關。用酶標儀在

450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中小鼠琥珀酸脫氫酶(SDH)濃度。

試劑盒組成

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.    標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

2.    加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.    溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.    配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.    加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.    溫育：操作同 3。

8.    洗滌：操作同 5。

9.    顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10.  終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.   測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。