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恒遠實驗下載:抗酶復合物的應用于細胞ELISA

閱讀:213          發布時間:2014-3-31
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    應用酶標抗體進行免疫測定的方法較多,非均相酶免疫測定是目前應用zui廣泛的一類酶免疫檢測技術,其中以酶聯免疫吸附試驗zui常用,它可用于測定抗體,也可測定可溶性抗原及細胞抗原。而酶-抗酶復合物多用于免疫組織化學。以下著重介紹ELISA和免疫酶組化技術。
試劑及配制
1、洗滌液(pH 7.4 PBS)
     KH2PO4              0.2g
     Na2HPO4·12H20      2.9g
     NaCl               8.0g
     KCl                0.2g
     蒸餾水加至         1000ml
2、一抗或配體和酶標抗體
操作方法
1、將不同數量的陽性或陰性細胞與不同濃度的抗體進行反應,用以確定zui適細胞數和抗體的工作濃度;
2、將細胞懸液于4℃,1500r/min離心5min,棄上清,重懸于冰冷的洗滌液中,計數并調整細胞濃度;
3、取錐形或圓形凹孔板,加入zui適細胞數(1-5´105個/孔),100ml/孔,4℃,1500r/min離心5min,吸去上清;
4、混合器短時振搖,使沉淀的細胞分散;
5、加入一定稀釋度抗體或配體,4℃孵育1.5h,間隔15min輕輕振搖一次;
6、4℃,1500r/min離心5min,吸去上清;用洗滌液洗滌3次,棄上清;
7、加入zui適工作濃度酶標抗抗體或酶標抗體(抗配體),4℃孵育1.5h,間隔15min輕輕振搖一次;
8、4℃,1500r/min離心5min,吸去上清;用洗滌液洗滌3次,棄上清;
9、加入底物溶液,100ml/孔,避光室溫顯色20-30min,間隔10min輕輕振搖一次;
10、4℃,1500r/min離心5min,轉移上清至空孔中,用酶聯檢測儀測定OD值。

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