晚期糖基化終端產物（AGEs）檢測說明書

越來越多的證據指出晚期糖基化終端產物（AGEs）修飾蛋白嚴重影響到老齡化人群的健康問題。AGEs是葡萄糖與自由的蛋白質氨基基團發生非酶促糖基化反應的終端不可逆代謝產物的總稱。其在人體內的積累會引發組織或器官一系列的病理性變化，從而導致白內障、阿爾茨海默氏病、骨關節炎、心功能不全等疾病發生。糖尿病（高血糖）病發也與AGE在體內積累速度加快有關。

研究發現AGEs的來源主要是葡萄糖，還有二羰基化合物、短鏈還原糖和葡萄糖的其他代謝途徑。目前確定結構屬于AGE的單體化合物有CML、CEL、Pentosidine, Pyrraline, Imidazolone, Crosslin等，針對這些化合物和AGEs、AGE1～4生產的抗體大量應用于生命科學和醫學領域，發表的相關論文一一都證實了AGEs是老化、與老化相關的慢性疾病發生的重要影響因素。

 

上海恒遠生物科技有限公司晚期糖基化終端產物（AGEs）試劑盒*，提供技術指導。您的咨詢與訂購，：   手機    ：何

 

檢 測 原 理

葡萄糖來源的AGEs （Glc-AGEs）ELISA試劑盒利用的是基于“三明治”原理的固相酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。如右圖所示，96孔板的表面有一層單克隆抗體涂層可直接識別樣品中Glc-AGEs的特異性抗原位點， 然后使用HRP標記的anti-AGE抗體結合Glc-AGEs形成“三明治”復合物，zui后酶顯色對樣品進行定性和定量研究。

檢 測 對 象

人或其他動物的純化蛋白、血漿、血清和細胞裂解液。

試 劑 盒 成 分

（1） Antibody coated microtiter plate, 96 wells, 1 plate

（2） Glucose-derived AGEs standard, 250 uL×2

（3） Reference standard and sample diluent, 15 mL×1

（4） HRP- anti AGEs antibody concentrate（×100）, 60 uL×1 （mouse monoclonal antibody）

（5） OPD （o-phenylendiamine） tablets, 2 tab.

（6） Substrate solution, 30 mL×1

（7） Stop solution, 15 mL×1

（8） Wash buffer concentrate （×20） , 30 mL×1

（9） Dilution plate, 1 plate

實 驗 準 備

工   作   液   配   制	清  洗  液	使用前確保wash buffer濃縮液內無結晶顆粒，往30 ml的濃縮液內加入570 ml去離子水即為工作液，此溶液可以保存在2-8℃zui多放14天。
	抗體稀釋液	用10倍體積的清洗液稀釋"Reference standard and sample diluent"即可。
	標 準 溶 液	用等體積"Reference standard and sample diluent" 稀釋"Glucose-derived AGEs standard"（500ng/ml），如下圖所示，依次配成250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, and 7.82 ng/ml的溶液。
	HRP標記-AGEs 抗體（100×）	用5 ml 的抗體稀釋溶液稀釋50ul 的HRP-anti AGEs antibody濃縮液，稀釋后的抗體不能保存。
	顯  色  液	在使用前加1片OPD tablet到13 ml 底物溶液即可，此溶液需現配現用。
待測樣品的準備		用"Reference standard and sample diluent"稀釋樣品，若樣品濃度非常高，需用PBS進行預稀釋，zui后再調整濃度至100×或更高。

 

實 驗 準 備

1	96孔板準備	加入300 ul的清洗液至每個孔內，溫育30 min；*倒掉孔內溶液后，再加入300ul 清洗液。再重復此步2次。
2	一 抗 反 應	按50 ul/孔的量加入標準溶液、稀釋樣品孵育1 hour，可以做兩個平行。孵育完成后吸去反應液，用300 ul清洗液清洗3次。
3	二 抗 反 應	加50 ul/孔的100倍稀釋的HRP- anti AGEs antibody，孵育1 hour。孵育完成后吸去反應液，用300 ul清洗液清洗3次。
4	顯       色	加100 ul/孔顯色液，孵育10 min；
5	終 止 反 應	加100ul/孔終止液終止酶顯色反應；
6	讀取吸光度	酶標儀在490 nm下讀取吸光值；
7	計 算 結 果	使用標準曲線計算出AGEs的濃度，使用4-Parameter Logistic Model分析數據。