化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
考馬斯亮藍(lán)G－250染色法測定蛋白含量
閱讀：5168 發(fā)布時間：2012-10-26考馬斯亮藍(lán)G－250染色法測定蛋白含量
1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>掌握考馬斯亮藍(lán)G－250染色法測定蛋白含量的原理和方法。
2、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
實(shí)驗(yàn)原理：考馬斯亮藍(lán)G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的zui大吸收峰的位置（λmax），由465 nm變?yōu)?/span>595 nm，溶液的顏色由棕黑色變?yōu)樗{(lán)色。經(jīng)研究認(rèn)為，染料主要是與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸（特別色精氨酸）和芳香族氨基酸殘基相結(jié)合。在595 nm下測得的吸光度A595 nm,與蛋白質(zhì)濃度成正比。
試劑與材料：
1. 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液
稱取牛血清白蛋白（BSA）10mg，溶于100ml水，配置成100μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。
2. 考馬斯亮藍(lán)G-250染料試劑
100 mg考馬斯亮藍(lán)G-250溶于50 ml95％的乙醇后，再加入120 ml85％的磷酸，用水稀釋至1 L。
3. 材料：豆芽
操作步驟：
1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
取試管6支按下表操作，搖勻，2～5 min后比色（595 nm），1管為空白對照管。作吸光度-蛋白濃度曲線。
| 管 號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 1.0 mg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)（ml） | 0 | 0.20 | 0.40 | 0.60 | 0.20 | 0 |
| 蒸餾水（ml） | 1.00 | 0.80 | 0.60 | 0.40 | 0.80 | 1.00 |
| 考馬斯亮藍(lán)G-250染料（ml） | 5 | |||||
2樣品蛋白濃度測定
準(zhǔn)確稱取豆芽1.0000g，加入用10mL研磨成勻漿后，5000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)入小燒杯中。
準(zhǔn)確吸取樣品上清液1 ml置干凈試管中，加入考馬斯亮藍(lán)G-250染料5 ml并搖勻，2～5 min后比色（595 nm）。對照標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣品蛋白濃度。
上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒供應(yīng)商是屬于國內(nèi)合資企業(yè)，也是生命科學(xué)試劑的運(yùn)營商，銷售網(wǎng)絡(luò)已遍布全國各個科研單位，銷售的產(chǎn)品涵蓋了生物工程領(lǐng)域的各個方面，可提供的常規(guī)生化試劑、酶聯(lián)免疫試劑盒、細(xì)胞因子、抗體、等方面相關(guān)產(chǎn)品。在長期的銷售實(shí)踐中，我們形成了*的市場優(yōu)勢：產(chǎn)品齊全、價格合理、經(jīng)營穩(wěn)健、信息反饋及時、并能隨時隨地享受國外供應(yīng)商zui直接、zui周到、zui完善的售后服務(wù)。