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　　　　人胰島素樣生長因子結合蛋白3試劑盒使用說明書

藥品名稱：

通用名：人胰島素樣生長因子結合蛋白-3（IGFBP-3）酶聯免疫分析試劑盒

使用目的：

人胰島素樣生長因子結合蛋白3試劑盒用于測定人血清、血漿、或其它相關組織液中胰島素樣生長因子結合蛋白-3（IGFBP-3）含量。

實驗原理

人胰島素樣生長因子結合蛋白3試劑盒用于測定人血清、血漿、或其它相關組織液中應用夾心法測定標本中人胰島素樣生長因子結合蛋白-3（IGFBP-3）水平。用純化的人胰島素樣生長因子結合蛋白-3（IGFBP-3）受體包被微孔板，往微孔中依次加入IGFBP-3，再與HRP標記的羊抗人受體結合，形成免疫復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素樣生長因子結合蛋白-3呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中胰島素樣生長因子結合蛋白-3（IGFBP-3）濃度。

試劑盒組成

1	20倍濃縮洗滌液	30ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（135μg/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標本要求

1．標本采集后盡早進行實驗。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

3．可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

人胰島素樣生長因子結合蛋白3試劑盒操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為90μg/L，60μg/L ，30μg/L，15μg/L，7.5μg/L）。

2.         加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.     測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

人胰島素樣生長因子結合蛋白3試劑盒注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．  請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．嚴格按照說明書操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

7．本試劑不同批號組分不得混用。底物請避光保存。

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．如與英文說明書有異，以英文說明書為準

檢測范圍：

5μg/L -100μg/L

規格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月