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關(guān)于抗體和重組蛋白的安穩(wěn)性
閱讀：1147 發(fā)布時間：2019-12-27 1. 收到抗體和重組蛋白后的操作
收到抗體和重組蛋白后（大部分抗體和重組蛋白是溶液態(tài)），請必須在 4℃，12000rpm，離心 3 分鐘，再打開管蓋進行分裝、溶解和保存（假如抗體和重組蛋白體積小于 50μl，請延長離心時刻至 5 分鐘，以保證悉數(shù)抗體和重組蛋白均離心下來，干粉狀況的同樣適用）。抗體和重組蛋白運用特制的貯存管，只有在 12000rpm 離心 3 分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體和重組蛋白悉數(shù)離心下來（即使是在 10000rpm 離心也會離心不*，導(dǎo)致出現(xiàn)抗體和重組蛋白的量不足的現(xiàn)象）。請詳細閱覽說明書，并依照推薦的保存條件正保證存和運用抗體和重組蛋白。
2. 抗體和重組蛋白的長時間保存
關(guān)于大部分抗體和重組蛋白，比較合適的保存方法是：抗體分裝后保存在-20℃，重組蛋白分裝后保存在-80℃。
1）防止將抗體和重組蛋白保存在自動除霜冰箱中，將抗體和重組蛋白保存在冰箱里層，防止溫度改變形成重復(fù)凍融。
2）分裝的量以一次試驗用完為好，少不能少于 10μl 每份。由于分裝體積越小，抗體和重組蛋白的濃度越可能會受到蒸騰以及管壁吸附的影響。
3）分裝能夠da程度的下降重復(fù)凍融對抗體和重組蛋白活性的危害，同時也下降了由于屢次從同一管中吸取抗體和重組蛋白形成的污染可能性。
4）抗體和重組蛋白工作液應(yīng)該當天配制當天用完，4℃ 保存盡量不要超過 1 天。
5）復(fù)融后的分裝抗體和重組蛋白假如一次用不完，將剩下母液保存在 4℃，防止再凍起來。
3. 抗體和重組蛋白的運送條件
一般的運送過程需求 1~2 周的時刻，所以是在低溫 4℃ 的條件下來完成的。4℃ 運送首要的目的是為了防止重復(fù)凍融對抗體和重組蛋白活性的危害（假如運用干冰運送，那么收到時抗體和重組蛋白是凍起來的，為了分裝就需求解凍，這就多了一次凍融的過程），所以運送過程中一般防止干冰運送。
4. 抗體和重組蛋白的短期保存
大部分 的抗體和重組蛋白收到后 4℃ 短暫保存 1~2 周，對抗體和重組蛋白活性沒有影響。假如抗體和重組蛋白很快會運用（1~2 周內(nèi)），推薦在 4℃ 保存，這是為了防止重復(fù)凍融對抗體和重組蛋白活性的危害。要害的一點是要根據(jù)說明書推薦的方法來正確的保存抗體和重組蛋白。
5. 抗體和重組蛋白的安穩(wěn)性
1）抗體的安穩(wěn)性是天然界長時間進化的成果，抗體是免疫系統(tǒng)中重要的分子之一，其安穩(wěn)性是天然進化挑選的成果，在眾多物種中，抗體分子構(gòu)成了保守而安穩(wěn)的結(jié)構(gòu)。
2）抗體的高 Tm 值，在室溫下，甚至短時刻溫度到達 50~60℃，抗體分子都能堅持正確折疊，堅持其應(yīng)有的活性。
3）抗體和重組蛋白的純度。選用先進的抗體和重組蛋白純化技能，保證抗體和重組蛋白產(chǎn)品的高純度，保障其抗體和重組蛋白產(chǎn)品的安穩(wěn)性。
4）抗體和重組蛋白的濃度。高濃度的抗體和重組蛋白產(chǎn)品可減少容器外表吸附形成的物質(zhì)丟失，高濃度的抗體和重組蛋白安穩(wěn)性更好。大部分抗體和重組蛋白濃度為 1 mg/ml，抗體和重組蛋白純度高，特異性好，效價更高。
6. 重組蛋白的特性
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存方法，原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀況，真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存，這樣使得重組蛋白十分安穩(wěn)，在-80℃ 條件下可保存數(shù)年。凍干粉在運用前需進行溶解，其中溶解的辦法十分要害，由于溶解不好會下降蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋運用過程中也需求細心注意，這些都是用戶在實踐使用中經(jīng)常遇到的問題。
1）原核細胞表達的重組蛋白。大腸桿菌表達的凍干重組蛋白，現(xiàn)已從包涵體中提純，添加了蛋白保護劑，運用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可，復(fù)溶凍干蛋白 100 μg，用 86μl 的超純水，輕輕搖晃使蛋白溶解，再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可*溶解，一定不能運用渦旋儀進行快速振動或劇烈搖晃。
2）真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯，還要進行翻譯后的加工，使得蛋白質(zhì)的空間折疊方法堅持正常，所以重組蛋白必須在真核細胞中進行，如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子，對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工，這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。咱們用溶液態(tài)來保存，堅持了其良好的活性和安穩(wěn)性。
3）重組蛋白的保護劑。在凍干和貯存過程中常用的保護劑或安穩(wěn)劑有糖類，多元醇，聚合物，外表活性劑，某些蛋白和氨基酸等。咱們通常加 8%（質(zhì)量比體積）的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖可顯著阻撓蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集，甘露醇也是一種遍及使用的凍干保護劑和填充劑。
無論是保存還是運送，請防止重復(fù)凍融。重復(fù)凍融，冰晶會破壞抗體和重組蛋白的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白變性構(gòu)成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變，然后下降抗體的結(jié)合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度。抗體和重組蛋白保存妥當與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性運用作防止將抗體和重組蛋白保存在自動除霜冰箱中，將抗體和重組蛋白保存在冰箱里層，防止溫度改變形成重復(fù)凍融。假如保存妥當，抗體和重組蛋白活性大部分都能夠堅持數(shù)年。