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    ELISA試劑盒免疫酶技能即是用酶(如辣根過氧化物酶)符號(hào)已知抗體(或抗原)，然后與安排標(biāo)本在必定條件下反響，假如安排中含有相應(yīng)抗原(或抗體)，抗原抗體彼此構(gòu)成的復(fù)合物中所帶酶分子遇到底物時(shí)，能催化底物水解、氧化或復(fù)原，發(fā)生顯色反響，這么就能夠識(shí)別出標(biāo)本抗原(抗體)散布的方位和性質(zhì)，通過圖像剖析并可到達(dá)定量的意圖。

 

    ELISA試劑盒免疫酶技能與免疫熒光技能

 

    免疫熒光技能雖已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)的研討與診斷，可是熒光抗體染色標(biāo)本不能長時(shí)間保存，對(duì)安排細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)分辨不清，免疫酶技能則能戰(zhàn)勝上述缺乏，符號(hào)免疫酶技能的敏感性更優(yōu)于免疫熒光法，對(duì)白臘切片標(biāo)本尤為適用，為免疫病理研討拓荒了一條新途徑，酶顯色商品具有較高的電子密度，通過恰當(dāng)處理還能夠進(jìn)行免疫電鏡調(diào)查，免疫酶組化技能分為酶符號(hào)法與非符號(hào)抗體技能，前者是將酶通過交聯(lián)劑在抗體分子上，構(gòu)成酶符號(hào)抗體。后者是將酶作為抗原與相應(yīng)的特異性抗體銜接進(jìn)行的免疫反響，稱為非符號(hào)抗體酶技能。

 

    免疫酶技能運(yùn)用酶催化底物反響的生物擴(kuò)大作用，進(jìn)步特異性抗原-抗體免疫學(xué)反響查看敏感性的一種符號(hào)免疫技能。該技能所用的酶請(qǐng)求純度高、催化反響的轉(zhuǎn)化率高、專一性強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定、來歷豐厚、報(bào)價(jià)不貴、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定，繼續(xù)保存著它的活性部分和催化才能。在受檢標(biāo)本中不存在與符號(hào)酶一樣的酶。別的它的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存，報(bào)價(jià)低廉，有色商品易于測(cè)定，光吸收高。

 

    ELISA試劑盒固相載體選用免疫酶技能
免疫酶技能的首要試劑為固相的抗原或抗體、酶符號(hào)的抗原或抗體和與符號(hào)酶直接相關(guān)的酶反響底物。可作固相載體的物質(zhì)許多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的功能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保存本來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式，在測(cè)定過程中，它作為載體和容器，不參加化學(xué)反響，加之它的報(bào)價(jià)低廉，所以被普遍選用。

 

    聚苯乙烯載體的形狀首要有三種：小試管、小珠和微量反響板。小試管的特色是還能兼作反響的容器，zui終放入分光光度計(jì)中比色。小珠通常為直徑0.6cm的圓球，外表經(jīng)磨砂處理后吸附面積大添加。如用特別的洗刷器，在洗刷過程中使圓珠翻滾淋洗，作用非常好。zui常用的載體為微量反響板，于ELISA測(cè)定的商品也稱為ELISA板，規(guī)范板形是8×12的96孔式。為便于作少數(shù)標(biāo)本的查看，有制成8聯(lián)或l2聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與規(guī)范ELISA板一樣。ELISA板的特色是能夠同時(shí)進(jìn)行很多標(biāo)本的查看，并可在特定的比色計(jì)上敏捷讀出成果。如今已有多種自動(dòng)化儀器用于微量反響板型的ELISA查看，包含加樣、洗刷、保溫、比色等過程，對(duì)操作的規(guī)范化極為有利。

 

    杰出的ELISA板應(yīng)該是吸附功能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間功能附近。聚苯乙烯ELISA板因?yàn)榕淞系牟灰粯雍图夹g(shù)的不一樣，各種商品的質(zhì)量區(qū)別很大。因而每一批號(hào)的聚苯乙烯制品在運(yùn)用前須查看其功能。常用的查看辦法為：以必定濃度的人IgG(通常為10ng/ml)包被ELISA板各孔后，每孔內(nèi)參加恰當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫后洗刷，加底物顯色，停止酶反響后別離測(cè)每孔溶液的吸光度。操控反響條件，使各讀數(shù)在0.8左右。核算一切讀數(shù)的均勻值。一切單個(gè)讀數(shù)與均勻讀數(shù)之差應(yīng)小于10%.與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯板的特色為質(zhì)軟板薄，可切開，價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附功能比聚苯乙烯高，但空白值有時(shí)也略高。

 

    ELISA試劑盒為對(duì)比不一樣固相在某一ELISA測(cè)定中的好壞，可用以下辦法加以查驗(yàn)：用別的免疫學(xué)測(cè)定辦法選出一個(gè)典型的陽性標(biāo)本和一個(gè)典型的陰性標(biāo)本。將它們別離進(jìn)行一系列稀釋后，在不一樣的固相載體上按預(yù)訂的ELISA操作過程進(jìn)行測(cè)定，然后對(duì)比測(cè)定成果。在哪一種載體上陽性成果與陰性成果區(qū)分zui大，這種載體即是這一ELISA測(cè)定的zui合適的固相載體。

 

    除塑料制品外，固相酶免疫測(cè)定的載體還有兩種資料：一是微孔濾膜，如**纖維素膜、尼龍膜等，這類測(cè)定形式將在本章“膜載體的酶免疫測(cè)定”中介紹。另一種載體是以含鐵的磁性微粒的，反響時(shí)固相微粒懸浮在溶液中，具有液相反響的速率，反響完畢后用磁鐵招引作為別離的手法，洗刷也非常便利，但需裝備特別的儀器