詳細介紹
大鼠單核細胞趨化蛋白3試劑盒 大鼠MCP-3 大鼠elisa試劑盒
產品名稱:大鼠單核細胞趨化蛋白3試劑盒
各種種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
標本齊全:血清、血漿、細胞培養上清液、組織勻漿、組織液、關節液、胸腔溢液等…
檢測方法:酶聯免疫法/酶免法(ELISA)
產品用途:For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費代測服務.
試劑:
(1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):
NaHCO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸餾水至1000ml
(2) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克 KCl 0.2克
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸餾水至1000ml
(3) 稀釋液:
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
(4) 終止液(2M H2SO4):
蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml
0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml
加蒸餾水50ml。
(6) TMB(四甲基聯苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
底物緩沖液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2 32μl
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物緩沖液(PH5.5) 1ml
3%H2O2 2μl
(8) 抗原、抗體和酶標記抗體。
(9) 正常人血清和陽性對照血清。
操作步驟:
用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
↓
加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
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于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml, 37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
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加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
↓
終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
↓
結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性
操作步驟:
用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性 。
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