中性粒細胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)的功能包括粘附、移動、吞噬殺菌等,是機體天然免疫力的重要組成部分。 試劑及材料 1. 白色葡萄球菌 2. 肉湯培養基 3. 鹼性美藍液 ELISA試劑盒樣品類型(SAMPLE TYPES): 標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清 或血漿。每個標本量收集體積=100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。 樣品采集: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分 激素類標本需添加抑肽酶。 ELISA試劑盒注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在 4 ℃ 備用,如有特殊 原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復凍融。標本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時, -20 ℃ 可保 存 1 個月。 -70 度可保存 6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 操作方法 1. 菌液的制備 將白色葡萄球菌接種于中,放37℃溫箱內培養12h左右;置水浴中加熱100℃ 10min殺死細菌,用無菌生理鹽水稀釋成6×108 細菌/ml備用; 2. 用血紅蛋白吸管吸取受試者耳垂或指血40μl,立即加入盛有20μl肝素(濃度為20U/ml)的潔凈凹玻片的凹孔內,輕輕攪動混勻, 再加上述葡萄球菌菌液20μl充分混勻。然后置入鋪有濕紗布的有蓋容器內(此容器先放37℃溫箱中預溫),在37℃溫箱中作用30min,其間每隔10min搖勻一次; 3. 作用完畢,取1小滴混合液置于潔凈無油污的載玻片一端,推成薄片。待干后,用甲醇固定4~5min,鹼性美藍液染2~3min,置油鏡下觀察。隨機計數100個中性粒細胞,分別記錄發生吞噬和未吞噬的白細胞數,對有吞噬作用的白細胞,應同時記錄所吞噬的細菌數; 結果分析 吞噬細胞%=即100個中性粒細胞中吞噬有細菌的細胞數; 吞噬指數=將100個中性粒細胞所吞噬的細菌總數除以100,得到每個白細胞吞噬細菌的平均數,即為吞噬指數。 |