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雌、雄性大鼠局灶性腦缺血 － 再灌注早期腦損傷的研究* ＊
郭淑娟1，王琮民2＊＊
(1． 邯鄲市中心醫(yī)院 老年病科，河北 邯鄲 056001; 2． 河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，河北 邯鄲 056000)
［摘 要］目的: 研究性別對局灶性腦缺血 － 再灌注大鼠早期腦損傷的影響。方法: 隨機(jī)取雌、雄健康 SD 大鼠各 12 只，分別記為 F 組和 M 組，采用栓線法制作大鼠中動脈栓塞模型，于缺血 2 h 再灌注 24 h 后斷頭取腦，采用 TTC 染色并測量各組大鼠腦梗死體積，采用新型熒光探針 H2DCF-DA 監(jiān)測大鼠腦內(nèi)活性氧自由基(ROS)陽性細(xì)胞數(shù)目并檢測平均熒光強(qiáng)度。結(jié)果: 缺血 2 h 再灌注 24 h 內(nèi)，F(xiàn) 組和 M 組大鼠的死亡率分別為 8. 33 % 和16. 77 % ，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞ 0. 05);TTC 染色顯示，F(xiàn) 組腦梗死體積為(21. 42 ± 3. 54)% ，M 組為(40. 01 ±4. 92)% ，F(xiàn) 組小于 M 組 (P ＜ 0. 05);H2DCF-DA 染色顯示，F(xiàn) 組和 M 組的腦缺血半暗帶區(qū) ROS 陽性細(xì)胞數(shù)目分別為 8. 56 ± 1. 89 和 19. 04 ± 1. 37，F(xiàn) 組少于 M 組(P ＜ 0. 05)，平均熒光強(qiáng)度分別為 20. 58 ± 0. 89 和 39. 25 ± 1. 41，F(xiàn) 組少于 M 組(P ＜ 0. 05)。結(jié)論: 雌鼠缺血 － 再灌注損傷在短期內(nèi)較輕，其機(jī)制可能與雌性大鼠腦組織抑制氧
自由基能力較強(qiáng)有關(guān)。［關(guān)鍵詞］性別因素; 腦缺血; 腦梗死; 體積; 氧自由基缺血性腦卒中一般是指由于腦動脈粥樣硬化引起血管腔狹窄或*閉塞，導(dǎo)致局部腦血流中斷，腦細(xì)胞缺血缺氧軟化壞死的疾病。缺血性腦卒中的危害性大，*低，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［1］。有報道指出，絕經(jīng)前女性的腦卒中發(fā)病率低于同齡男性，而且對缺血損傷的耐受性高，但絕經(jīng)后女性的腦卒中發(fā)生率顯著增加，提示雌激素水平變化與缺血性腦病的發(fā)生發(fā)展可能有一定關(guān)系［2］。有研究發(fā)現(xiàn)雌激素可促進(jìn)卒中后的腦神經(jīng)再生，有利于神經(jīng)功能恢復(fù)［3］。以往多采用去卵巢或絕經(jīng)的雌性大鼠觀察雌激素對缺血性腦卒中的影響［4 － 6］，但對同等損傷程度、正常生理激素水平及性別因素是否會對缺血性腦卒中產(chǎn)生影響，特別是缺血 － 再灌注短期內(nèi)的影響鮮有報道，本實驗探討正常生理激素水平下性別對局灶性腦缺血 －再灌注大鼠早期腦損傷的影響。
1 材料與方法
1. 1 試驗設(shè)備及試劑呼吸機(jī)(CWE 公司，美國)、DGD-300S 雙極電凝 (Sigma 公司，美國)、反饋式溫度調(diào)節(jié)儀(CZ 公司，美國)、透射電鏡(Olympus 公司，日本)、BH-2手術(shù)顯微鏡 ( Olympus 公司，日本)、高速離心機(jī)(Beckman 公 司，美 國); TTC ( 上 海 恒 遠(yuǎn) 公 司)、H2DCFA-DA 試劑盒(CWE 公司，美國)，水合氯醛(10% )、磷酸二氫鈉等。
1. 2 試驗動物及模型制作成年 SD 雌、雄大鼠各 12 只，分別記為 F 組和M 組，體質(zhì)量 250 ～ 300 g，許可證號 SYXK( 冀)2014 － 0038，采用標(biāo)準(zhǔn)配方飼料分籠飼養(yǎng)，室溫 22～ 25 ℃，術(shù)前禁食，自由進(jìn)水。大鼠用 10% 水合氯醛腹腔注射麻醉(3. 5 μL /g)，取頸部正中切口，上切至頸與下頜反折處，下切至胸骨角，剪開闊筋膜，找左側(cè)頸總動脈(CCA) 分叉、分離左側(cè)頸外動脈(ECA) 和頸內(nèi)動脈( ICA)，結(jié)扎 ECA 遠(yuǎn)心端，離斷，CCA 和 ICA 用動脈夾夾閉，在 ECA 上剪“V”型口并將備好的栓線沿剪口插入，輕輕結(jié)扎，然后松ICA 動脈夾，栓線調(diào)整角度順勢插入 ICA，遇阻力停止，深度約為 18 mm。將栓線與左側(cè) CCA 結(jié)扎固定，移去 CCA 動 脈 夾，腦缺血模型制備成功。2 h后，將栓線從顱內(nèi)輕輕拔出，從球端退至 ECA止，剪掉多余的線并縫合皮膚，再灌注開始，記錄再灌注時間至 24 h 時止［7］。
1. 3 測定腦梗死體積再灌注 24 h 時，大鼠腹腔注射過量 10% 水合氯醛麻醉，迅速斷頭，取完整全腦， － 24 ℃ 冷凍30 min，從額極至枕極沿冠狀位切 2 mm 厚度切片6 片，除第 5 片用于 H2DCF-DA 染色計數(shù) ROS 細(xì)胞外，其余 5 片均浸泡于 2% TTC 染色液中，37 ℃溫箱中孵育 20 min，每隔 5 min 翻動正反面，拍照，Imageplus5. 0 計算腦梗死體積。腦梗死體積百分比 = (A － B) /A × 100% ，A 為健側(cè)大腦半球體積= (A1 + A2 + …A6 )·h，B 為梗死側(cè)非梗死區(qū)大腦半球體積 = (B1 + B2 + …B6 )·h，A1 為第 1 片切片健側(cè)腦組織面積，B1 代表第 1 片梗死側(cè)非梗死區(qū)腦組織面積，h 表示切片厚度［8］。
1. 4 測定活性氧自由基(ROS)陽性細(xì)胞數(shù)目每個大鼠均取第 5 片腦切片用 H2DCF-DA 染色，按說明書操作，每張切片同等放大倍數(shù)拍照，借用 NIS Element 軟件，確定腦組織內(nèi)的 ROS 陽性細(xì)胞數(shù)和其分布密度。
1. 5 統(tǒng)計學(xué)方法用 SPSS 20. 0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩組死亡率比較用 Fisher 精確概率法，計量資料用均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差( x ± s )表示，組間比較用單因素方差分析法，P＜ 0. 05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

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