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冰王燒燙膏對大鼠深Ⅱ度燒傷的修復及機制研究
馮啟凱1，曲梅花1，季萬勝2，李 艷1，辛 亭1，黎瀚文1，劉鳳嬌1
( 1． 濰坊醫學院，山東省高校應用藥理學重點強化建設實驗室，山東 濰坊 261053;2． 濰坊醫學院附屬醫院，山東 濰坊 261031)基金項目: 國家教育部留學回國人員科研啟動基金( 2011 年第 43批)
作者簡介: 馮啟凱，男，碩士研究生
通信作者: 曲梅花，女，副教授，碩士生導師，研究方向: 神經內分泌
藥理學，E-mail: qumeihua@ hotmail． com

摘要: 目的 研究探討冰王燒燙膏對大鼠深Ⅱ度燒傷創面的修復及機制。方法 雄性 Wistar 大鼠 60 只，制備深Ⅱ度燒傷創面的大鼠模型后，隨機分為燒燙膏組、京萬紅組、燒傷模型組，每組 20 只。測量大鼠燒傷后 1、3、7、13、21 d 皮膚創面的愈合率和血清 TNF-α 含量; 燒傷后 4d 免疫熒光法測 glut-2 受體的表達變化。結果 燒傷后 1 d 各組創面愈合率比較，差異無統計學意義( P ＞ 0． 05) ，7、13、21 d 燒燙膏能明顯縮短燒傷大鼠皮膚創面愈合的時間，提高愈合率( P ＜ 0． 01) 。燒傷后 1、3、7、13、21 燒燙膏組大鼠血清 TNF-α 水平呈明顯下降，與模型組比較差異有顯著性( P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) 。和模型組比較，燒燙膏組 glut-2 受體表達數目增加，差異有統計學意義( P ＜ 0． 01) 。結論 冰王燒燙膏對燒傷皮膚創面具有良好的修復作用并可能與降低血清 TNF-α 水平和增加 glut-2 受體表達有關。
關鍵詞: 燒燙膏; 燒傷; 創面愈合; TNF-α; glut-2 受體; 熒光抗體反應

冰王燒燙膏系運用白礦油、白芝麻油、冰片等為主藥制備而成的一種外用中藥復合乳劑，在燒傷臨床沿用多年，具有促進表皮細胞、組織細胞再生，有效避免瘢痕形成，減輕燒燙傷對皮膚的損傷度的功效，然而其作用機制一直未明。本實驗通過觀察冰王燒燙膏對大鼠深Ⅱ度燒傷創的治療作用，探討其可能的作用機制，為進一步促進其在臨床廣泛推廣應用提供實驗依據和理論基礎。
1 材料與方法
1． 1 材料
1． 1． 1 試驗動物 雄性 Wistar 大鼠 60 只，SPF 級，重量 200 ～ 220 g，由山東魯抗醫藥股份有限公司實驗動物室提供，許可證號: SCXK 魯 20130001。
1． 1． 2 主要試劑和試驗儀器 冰王燒燙膏( 平輿冰王生物工程有限公司，批號 20140105) ; 京萬紅
( 天津 達 仁 堂 京 萬 紅 藥 業 有 限 公 司，國 藥 準 字Z12020440，批號 211897) ; 硫化鈉( 天津博迪化工股份有限公司) ; 腫瘤壞死因子-α 酶聯免疫檢測試劑盒( 上海恒遠生化試劑有限公司) ; Anti-Glut-2R ( 北京博奧森生物技術有限公司) ; 高速冷凍離心機( 德國 SIGMA 公司) ; 奧林巴斯 IX71 顯微鏡( 日本奧林巴斯公司) 。
1． 2 試驗方法
1． 2． 1 大鼠分組及背部燒傷模型的制備 wistar雄性大鼠 60 只，隨機分為三組即燒燙膏組，京萬紅
組，燒傷模型組，每組 20 只。用 8% 硫化鈉溶液在實驗前 24 h 對大鼠背部兩側皮膚進行脫毛，脫毛面積 5 cm × 6 cm 左右，約 1 min 后用水充分清洗脫毛區，以防過度刺激皮膚。用 3% 戊ba比妥鈉( 40 mgkg － 1) 腹腔麻醉后將大鼠四肢盡量伸展，于俯臥位固定在木質操作板上。室溫下，將注滿沸水直徑4 cm 一端無堵頭的中空大離心管直立于大鼠脫毛部，與皮膚緊密接觸且保證水不流出。沸水與皮膚持續接觸 15 s，將操作板及大鼠連同塑料管迅速翻轉，造成深Ⅱ度燒傷模型( 經病理組織學檢查) ，立即腹腔內注射乳酸鈉林格氏液 5 mL 抗休克［1］。
1． 2． 2 創面處理及給藥 燒燙膏組、京萬紅組每天早中晚 3 次分別涂以燒燙膏和京萬紅; 模型組在
相同時段涂無菌生理鹽水。總給藥時間持續 4 周。為防其舔舐傷口，所有大鼠造模后均在其頭頸部套
自制紙硬殼項圈。在給藥期間，所有大鼠單獨分籠飼養，自由飲水并給予普通飼料喂養。
1． 2． 3 觀察指標 ( 1) 大體觀察每次換藥時肉眼對比觀察各組燒傷創面水腫滲出程度，是否有分泌
物及創周紅腫等。( 2) 觀察創面愈合率按照 Nagelschmidt 法，于燒傷后不同時間用透明塑料薄膜覆
蓋于大鼠創面描記創面邊緣，用規格相同紙殼按照描記的邊緣剪下同樣大小的面積進行稱重。創面
愈合判斷標準是痂皮自行脫落且有新生上皮形成。以燒傷第 1 天的面積作為原始面積，以后各時間點
測量的面積均和原始面積比。創面的面積轉換為紙殼的重量，計算公式如下:創面愈合面積百分比 = ( 原始燒傷面積 － 各時間點創面面積) /原始燒傷面積 × 100% 。記錄實驗后 1、3、7、13、21 d 各組大鼠創面愈合情況并對各組大鼠創面的平均愈合天數進行統計和計算。
1． 2． 4 TNF-α 的檢測 各組隨機選取大鼠 10 只于燒傷后 1、3、7、13、21 d 經眼內眥采集靜脈血 1 mL，室溫靜置于離心管 15 min 自凝，3 000 r·min － 1( r= 16 cm) ，離心 10 min 后取上層血清，于 － 80℃ 保存備用。血清中的 TNF-α 表達水平用 ELISA 法檢測，具體按說明書所述方法操作。
1． 2． 5 Glut-2 受體的表達 燒傷后 4 d 各組隨機選取大鼠 10 只頸椎脫臼處死，取末端回腸 2 ～ 3
cm，于 4% 多聚甲醛固定 24 h，石蠟切片，抗原修復，封閉，37℃ 孵 育 1 h，Glut-2R ( 兔 抗 鼠，1 ∶ 200 ) +0． 03% TritonX-100 室溫過夜，PBS 漂洗，熒光二抗FITC( 山羊抗兔，1∶ 200) ，37℃ 避光孵育 1． 5 h，PBS漂洗，甘油封片，熒光顯微鏡下觀察，隨機選取 10個高倍視野( 200 × ) ，記錄每個視野陽性細胞數目，取其平均值。
1． 2． 6 統計學處理 實驗資料以均數 ± 標準差( x± s) 表示，用 SPSS13． 0 進行重復測量數據的方差分析，兩兩比較采用 LSD-t 檢驗的方法，P ＜ 0． 05 表示差異有統計學意義。

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