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紅花黃色素注射液對(duì)高原地區(qū)顱腦損傷大鼠血漿
CGＲP 含量及神經(jīng)功能評(píng)分的影響
汪 濤，馬進(jìn)海，張廣華
( 青海大學(xué)附屬醫(yī)院，青海 西寧 810001)

摘要 目的: 探討紅花黃色素注射液治療高原地區(qū)顱腦損傷大鼠的效果及對(duì)血漿降鈣素基因相關(guān)肽( CGＲP)及神經(jīng)功能的影響。方法: 選取 120 只 SPF 級(jí)成年雄性 Wistar 大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組及紅花注射液低、中、高劑量組，每組各 24 只，所有大鼠均于高原地區(qū)( 4 300 米海拔) 飼養(yǎng) 30 d，除假手術(shù)組外各組大鼠建立顱腦損傷模型，假手術(shù)組和模型組分別腹腔注射等體積生理鹽水，紅花黃色素注射液低、中、高劑量組分別腹腔注射紅花黃色素注射液 15、30、60 mg /kg，連續(xù)給藥 14 d 后檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果: 模型組在干預(yù)第 3、7、14 天血漿 CGＲP、SOD顯著低于假手術(shù)組( P ＜ 0. 05) ，紅花黃色素注射液各劑量組血漿 CGＲP、SOD 在干預(yù)第 3、7、14 天顯著高于模型組
( P ＜ 0. 05) ; 模型組在干預(yù)第 3、7、14 天血漿 NSE、mNSS 評(píng)分、神經(jīng)細(xì)胞凋亡率及腦組織 5-HT 含量顯著高于假手術(shù)組( P ＜ 0. 05) ，紅花黃色素注射液各劑量組血漿 NSE、mNSS 評(píng)分、神經(jīng)細(xì)胞凋亡率及腦組織 5-HT 含量在干預(yù)第 3、7、14 天顯著低于模型組( P ＜ 0. 05) 。其作用呈量效關(guān)系。結(jié)論: 紅花黃色素注射液對(duì)高原地區(qū)顱腦損傷大鼠具有顯著的療效，能顯著增加血漿中 CGＲP 含量，改善大鼠神經(jīng)功能。
關(guān)鍵詞 紅花注射液; 高原地區(qū); 顱腦損傷; 降鈣素基因相關(guān)肽; 神經(jīng)功能

創(chuàng)傷性顱腦損傷為神經(jīng)外科常見疾病，是兒和青年致死、致殘的重要原因，隨著現(xiàn)代經(jīng)濟(jì)快速發(fā)
展和人口流動(dòng)增加，國(guó)內(nèi)各種交通事故、意外傷害等導(dǎo)致顱腦損傷比例逐年提升，嚴(yán)重的影響患者的生活質(zhì)量。青海地處西部，在高原環(huán)境下顱腦損傷已成為研究的熱點(diǎn)〔1〕。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為顱腦損傷為瘀血內(nèi)停，阻閉清竅所致，損傷發(fā)生后脈絡(luò)破損，血離靜脈，離經(jīng)之血化為瘀血，阻滯腦絡(luò)，導(dǎo)致患者腦失清靈，元神困擾，終引發(fā)了顱腦損傷的各種病理改變〔2〕。本研究觀察了紅花黃色素注射液對(duì)高原地區(qū)顱腦損傷模型大鼠血漿降鈣素基因相關(guān)肽以及神經(jīng)功能的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
1 材料與儀器
1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí)雄性 Wistar 大鼠 120 只，體質(zhì)量 180 ～ 220 g，購(gòu)自上海交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào): SCXK( 滬) 2015-01-004，所有大鼠均于高原地區(qū)( 4 300 米海拔) 飼養(yǎng) 30d。
1. 2 藥 物 與 試 劑 紅花黃色素注射 液，批 號(hào):20140418，浙江永寧藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn); 白細(xì)胞
介素 6 及神經(jīng)元特異性烯醇化酶酶聯(lián)免疫吸附試劑盒為武漢伊萊瑞特生物科技有限公司; 超氧化物歧化酶和丙二醛測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所; TUNEL 試劑，上海芯超生物科技有限公司; 內(nèi)
皮素、降鈣素相關(guān)基因肽檢測(cè)試劑，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司。
1. 3 主要儀器 5810Ｒ 高速冷凍離心機(jī)，德國(guó) Eppendorf 公司; MULTISKAN FC 酶標(biāo)儀器，賽默飛世
爾上海有限公司; CX41 顯微鏡，日本奧林巴斯; FS /FAS5030 石蠟切片機(jī)器，德國(guó) LETIZ 公司。
2 方法
2. 1 動(dòng)物造模、分組及給藥 大鼠禁食 8 h，禁水 2h 后采取腹腔麻醉，在大鼠矢狀線切開透皮 2. 0 cm，暴露出前囟、冠狀縫合兩側(cè)的頂骨，在大鼠右側(cè)前囟后 4 mm 中線旁開 2 mm 行直徑 5 mm 骨窗，保證硬膜的完整，使用 20 g 砝碼從 50 cm 高處垂直落下撞擊大鼠致傷形成顱腦損傷模型，以測(cè)定內(nèi)皮素含量和大鼠降鈣素基因相關(guān)肽含量顯著升高表示模型建立成功。成模動(dòng)物分為模型組及紅花黃色素注射液低( 15 mg /kg) 、中( 30 mg /kg) 、高( 60 mg /kg) 劑量組，另設(shè)假手術(shù)組，假手術(shù)組只進(jìn)行開顱不進(jìn)行撞傷。假手術(shù)組和模型組分別腹腔注射相應(yīng)體積生理鹽水，紅花黃色素注射液各組分別給予紅花黃色素注射液腹腔注射，連續(xù)治療 14 d。
2. 2 指標(biāo)檢測(cè)
2. 2. 1 血漿降鈣素基因相關(guān)肽( CGＲP) 、神經(jīng)元特異化烯醇化酶( NSE) 、超氧化物歧化酶( SOD) 檢測(cè):于各組大鼠干預(yù)后第 3、7、14 天將大鼠采取 10% 水合氯醛( 3 mL /kg) 腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血并加入肝素抗凝，分離血漿檢測(cè) CGＲP、NSE、SOD 水平，均采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定。
2. 2. 2 TUNEL 染色觀察各組大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡率: 斷頭取腦放置在冰盤剝離損部位大腦皮質(zhì)，生理
鹽水進(jìn)行沖洗放入試管置冰箱備用，常規(guī)制片及染色后在 200 倍顯微鏡下，每張切片隨機(jī)選取 5 個(gè)視
野觀察凋亡小體的數(shù)量，并計(jì)算凋亡率。凋亡率 = 凋亡小體視野內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞總數(shù)量 × 100%
2. 2. 3 腦組織中 5 羥色胺( 5-HT) 含量檢測(cè): 采用反相高效液相色譜法以二羥芐胺作為標(biāo)記物，每 10
mg 腦組織加入 50 mL 裂解液，加入內(nèi)標(biāo)后在冰浴內(nèi)進(jìn)行超聲破碎，勻漿，4 ℃，15 000 r/min 離 心 30min，取上清液，再離心 30 min，轉(zhuǎn)速溫度相同，使用0. 22 μm 濾膜在抽濾器進(jìn)行過(guò)濾，取出濾過(guò)液體 20μL，測(cè)定腦組織中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量。
2. 2. 4 大鼠神經(jīng)功能評(píng)分: 采用通用的改良大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分法( mNSS) 在干預(yù)后第 3、7、
14 天，該評(píng)分系統(tǒng)主要包含大鼠的感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)、反射、平衡四個(gè)方面，總分 0 ～ 18 分，13 ～ 18 分為重度損傷; 7 ～ 12 分為中度損傷; 1 ～ 6 分為輕度損傷; 正常為 0 分。
2. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SAS 10. 0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用 x珋± s 進(jìn)行描述，采用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，組間兩兩比較采用 LSD-t 檢驗(yàn); 以 P ＜0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

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