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動物血清論，恒遠生物記詳細知識資料
閱讀：1707 發布時間：2014-4-8 近這些天中，很多地區都是時時雨連天的，節后回來這新的一天中，上海恒遠來跟朋友們講動物血清論，恒遠生物記詳細知識資料。我們從其中的常規啊，處理啊等多方面來說明，下面我們就來看一看吧。
我們知道的，血清通常作為補充成分添加在基礎培養基內使用，能提供各種大分子蛋白，小分子量營養，水溶性成分的轉運蛋白，和其它一些細胞在體外所必需的成分。可以結合或中和一些生長因子中的有毒成分，并提供培養基的緩沖能力。細胞培養時血清的添加依賴于基礎培養基的化學組成，培養細胞的類型，及所用的培養系統。
采集：胎牛血清采用妊娠3-9個月的小牛胎兒心臟穿刺的方法采集。馬血清采自經細心飼養的供體畜群；新生牛血清采自出生10至14天的小牛。全部血清均按工業標準采集。
處理：（全部血清）收集的血液均在冷藏條件下處理。血清和血塊分離后立即將血清合并并冷凍。只有符合我們的檢測標準的血清才被接受作進一步處理。
熱滅活血清：熱滅活是在56℃水浴中嚴格控溫30分鐘。
透析血清：用10,000截留分子量的透析膜在0.15M的NaCl中進行透析，直到葡萄糖水平低于5mg/dl（用鄰甲苯胺測試法檢驗）。（伽馬射線照射血清）可按客戶要求對血清進行伽馬射線照射。通過伽馬射線照射以滅活各種動物血清中的病毒和支原體的方法已經得到證實。研究證實照射劑量在30-45kGy為宜。血清在此照射后物理化學特性和細胞培養表現沒有變化。
裝瓶：粗血清須通過一系列的過濾才成為成品。zui后的過濾步驟包括使用0.2微米和0.1微米的無菌過濾。胎牛血清須通過三
次0.1微米過濾，其他血清須通過0.2微米過濾。
質量控制：我們采取以下方法對每一批次的產品選取一定數量的樣品進行質量控制分析。
檢測：
1、化學檢測：使用低溫凝固點的方法檢測滲透壓，以保證符合產品規范。我們每天使用國家標準的技術研究所標定的標準溶液
對我們的滲透壓檢測儀器進行校準。同樣每天使用國家標準技術研究所標定的標準溶液對pH計進行校準。使用電泳圖譜鑒定血清的整體性質。樣品被轉移到硝酸纖維素基質中，并在緩沖體系內遷移。條帶經染色、清潔、干燥后用密度儀進行掃描，以檢測白蛋白和球蛋白組分的相對濃度。為證實是否在適當的條件下進行采血和處理， 使用修飾的Fleming方法對血紅蛋白進行分光光度檢測。
2、微生物學檢測：所有血清使用Barile&Kern的大體積方法檢測支原體。在推薦方法的檢測范圍內檢測結果是準確的。樣品至
少應該在肉湯中合并培養3個星期，同時要在瓊脂平板上進行不少于4次傳代培養。在有氧和厭氧（95%氮，5%C O 2）條件下，平板在36±2℃下孵育。在檢測過程中，每周對瓊脂平板進行一次微生物生長情況檢驗。使用Dienes染色法對懷疑被污染的瓊脂平板進行支原體菌落的檢測。然后，對平板進行再次鏡檢。對孵育肉湯瓶要定期進行濁度和pH值變動的檢測。在推薦方法檢測范圍內，所有血清也要使用Hoechst熒光DNA染色法進行不可在肉湯中培養的支原體檢測。
3、效能檢測：對每一批次的胎牛血清，我們都進行下述培養效能檢測。選擇血清zui重要的標準是其支持特殊細胞的生長能力。因此，除了保證血清通過嚴格的品質控制，我們也同時在實驗室條件下對血清的三個重要的培養效能進行檢測：克隆效率、貼壁效果和二倍體成纖維細胞生長促進。克隆效率分析：克隆效率實驗分析每一批胎牛血清促進小鼠骨髓瘤細胞及其衍生的雜交瘤細胞的克隆和生長能力。
血清的使用與儲存：
正確的使用及保存血清，才能使血清發揮應有的作用。
1、儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時應避免反復凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時現置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放，應盡快使用。
2、使用濃度：自從有了合成培養基，血清就是作為一種添加成分與合成培養基混合使用，使用濃度一般為5－20％，zui常用是10％。過多血清容易使培養中的細胞發生變化，特別是一些二倍體的無限細胞系，迅速生長之后容易發生惡性轉化。
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