技術文章
學習細菌的鞭毛染色法之鍍銀法染色
閱讀:3872 發布時間:2013-8-21實驗原理:細菌的鞭毛極細,直徑一般為10—20nm,只有用電子顯微鏡才能觀察到。但是,如采用特殊的染色法,則在普通光學顯微鏡下也能看到它。鞭毛染色方法很多,但其基本原理相同,即在染色前先用媒染劑處理,讓它沉積在鞭毛上,使鞭毛直徑加粗,然后再進行染色。常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配制而成?,F推薦以下兩種染色法。實驗方法
1.鍍銀法染色
(1)清洗玻片 選擇光滑無裂痕的玻片,選用新的。為了避免玻片相互重疊,應將玻片插在金屬架上,然后將玻片置洗衣粉過濾液中(洗衣粉煮沸后用濾紙過濾,以除去粗顆粒),煮沸20min。取出稍冷后用自來水沖洗、晾干,再放入濃洗液中浸泡5—6天,使用前取出玻片,用自來水沖去殘酸,再用蒸餾水洗。將水瀝干后,放入95%乙醇中脫水。
(2)菌液的制備及制片:菌齡較老的細菌容易失落鞭毛,所以在染色前應將待染細菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培養基斜面上(培養基表面濕潤,斜面基部含有冷凝水)連續移接3-5代,以增強細菌的運動力。zui后一代菌種放恒溫箱中培養12—16h。然后,用接種環挑取斜面與冷凝水交接處的菌液數環,移至盛有1—2mL無菌水的試管中,使菌液呈輕度混濁。將該試管放在37℃恒溫箱中靜置10min(放置時間不宜太長,否則鞭毛會脫落),讓幼齡菌的鞭毛松展開。然后,吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端,立即將玻片傾斜,使菌液緩慢地流向另一端,用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放空氣中自然干燥。
用于鞭毛染色的菌體也可用半固體培養基培養。方法是將0.3-0.4%的瓊脂肉膏培養基熔化后倒入無菌平皿中,待凝固后在平板中央點接活化了3-4代的細菌,恒溫培養12-16h后,取擴散菌落的邊緣制作涂片。
(3)染色
①滴加A液,染4—6min。
②用蒸餾水充分洗凈A液。
③用B液沖去殘水,再加B液于玻片上,在酒精燈火焰上加熱至冒氣,約維持0.5—1min(加熱時應隨時補充蒸發掉的染料,不可使玻片出現干涸區)。
④用蒸餾水洗,自然干燥。
(4)鏡檢:先低倍,再高倍,zui后用油鏡檢查。
結果:菌體呈深褐色,鞭毛呈淺褐色。
訂“酶聯免疫試劑盒”,7折優惠,上海恒遠生物堅持以,*的服務,zui多的讓利給客戶,訂本試劑盒不僅享受7折優惠,更返200元獎金,8.30至18.00在線服務,趕快來訂購吧http://www.shhyswsj.com/!