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在ELISA實(shí)驗(yàn)中我們經(jīng)常會(huì)碰到試劑盒變質(zhì)的問題，是什么原因?qū)е铝薊LISA試劑盒的變質(zhì)呢？接下來我就和大家說一說導(dǎo)致ELISA試劑盒變質(zhì)的原因有哪些。

 

導(dǎo)致ELISA試劑盒變質(zhì)的原因主要分為七種：

 

1、方法學(xué)的影響

　　ELISA測(cè)定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法，其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的bu公平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。

 

2、試劑因素

　　不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量一致，即使是通過批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也會(huì)存在差異，因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并保證保存條件。 嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對(duì)于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。

3、樣本因素

　　標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。

 

4、操作因素

    ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。

 

5、灰區(qū)的設(shè)置

　　通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽性"和“陰性"來報(bào)告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值"(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。

 

6、標(biāo)本復(fù)查

ELISA手工檢測(cè)過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法。

 

7、表示結(jié)果的常用方法

①定性測(cè)定。

②半定量測(cè)定，結(jié)果一般以滴度表示。

③定量測(cè)定，即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 

以上七種導(dǎo)致變質(zhì)的情況我們只要多加注意，ELISA試劑盒變質(zhì)的原因基本上也就不會(huì)存在了。