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鼎國自產 動物組織 / 細胞 / 血液基因組 DNA 提取試劑盒
價格;350元
純化效果檢測
取2-5μl得到的DNA產物,0.7%agarose電泳檢測DNA分子的完整性和紫外分光光度計檢測濃度和純度。
DNA在260nm處有吸收峰,檢測時應該使OD260值在0.1到1.0之間數值較準確。
OD260為1時大概相當于50μg/ml雙鏈DNA,40μg/ml單鏈DNA。
核酸濃度(μg/ml)=OD260×50×稀釋倍數。
OD260/OD280的值應該為1.7~2.0。
常見問題分析:
常見問題 | 可能原因 | 建議 |
柱子堵塞 | 裂解消化不充分 | 適當延長Proteinase K消化時間。 |
樣品過多 | 樣品量不要超過說明書所定zui大量;可適當增加Proteinase K的用量 | |
DNA產量低 | 將沉淀倒入柱子導致柱子堵塞 | 加大轉速和延長離心時間 |
Wash buffer A、Wash buffer B沒有加無水乙醇 | 按說明書加入無水乙醇 | |
洗脫效率低 | 洗脫液使用前于55-65℃預熱;洗脫液pH值不合適,應保證在7.5~8.5 | |
樣品裂解不* | 適當延長裂解時間。 | |
樣品不夠新鮮 | 盡量使用新鮮樣品 | |
DNA純度低 | 消化不* | 樣品量不要超過規定范圍;延長消化時間,使樣品充分消化 |
洗滌不當 | 嚴格按照說明書步驟洗脫 | |
乙醇未除干凈 | 適當延長晾干時間,使乙醇充分揮發 |
產品簡介:
本試劑盒采用自主研發的*裂解液和酶相結合的方法裂解材料,具有效率高、性能穩定、
重復性高、速度快等特點。材料被裂解并、經蛋白酶K消化后,DNA在高鹽低pH的條件下,
與硅基質膜特異性結合,在低鹽高pH值條件下,吸附的DNA被洗脫下來。
本試劑盒適用于各種動物組織、動物細胞和血液基因組DNA的提取。
提取的基因組DNA可以直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學實驗。
組成:
成分 | 50次 | 注意事項 |
RNase A | 0.5 ml | -20℃保存 |
Proteinase K | 0.5 ml | -20℃保存 |
Lysis Buffer A | 35 ml | 室溫低時可能有白色沉淀產生,加熱溶解即可 |
Lysis Buffer B | 25 ml | |
Wash buffer A | 27 ml | 用前加入18 ml 無水乙醇,充分混勻 |
Wash buffer B | 16 ml | 用前加入64 ml無水乙醇,充分混勻 |
Elution Buffer | 10 ml | |
離心柱 | 50個 | 單個zui大吸附量20 μg |
紅細胞裂解液 | 50ml | 4℃ |
可選試劑
編號 | 品名 | 規格 | 價格 |
NEP033 | 紅細胞裂解液 | 100ml | 40.00 |
實驗前試劑準備
Wash buffer A中加入18 ml 無水乙醇,充分混勻。
Wash buffer B中加入64 ml無水乙醇,充分混勻。
儲存條件: 請按照上表中注意事項的條件保存,其他未說明的可常溫或4度保存。
步驟:
1、樣品處理
全血:取50-300 μl全血,加入3倍體積的紅細胞裂解液,震蕩混勻,12000rpm離心1min,
去上清。加入600 μl Lysis Buffer A,震蕩混勻。
禽血:加入10-100 μl禽血,直接加入600 μl Lysis Buffer A,顛倒混勻。
動物組織:取20-50mg動物組織,液氮研磨或勻漿,加入100 μl PBS重懸樣品,
然后加入到準備好的600 μl Lysis Buffer A,振蕩混勻。
動物細胞:離心收集105-106個培養細胞,加入100 μl PBS重懸細胞,
加入600 μl Lysis Buffer A,震蕩混勻。
2、 加入10 μl Proteinase K,60 ℃水浴20 min~40 min,其間顛倒混勻數次。
如需消化RNA,可待樣品裂解*后加入10 μl RNase A,混勻,室溫放置10 min。
若加入樣品較多,可適當延長水浴時間,適量增加Proteinase K的量,按比例增加
Lysis Buffer A和Lysis Buffer B量。
3、 加入400 μl Lysis Buffer B,漩渦震蕩30 s。
4、 12,000 rpm離心5 min,將上清轉入離心柱中,靜置2 min。
上清可能出現少量白色漂浮物,此為未消化*的細胞和蛋白質。
5、 12,000 rpm離心1 min,棄廢液。
6、 加入700 μl Wash buffer A(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm離心 1min,棄廢液。
7、 加入700 μl Wash buffer B(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇), 12,000 rpm離 心1min,棄廢液。
8、 加入500 μl Wash buffer B,12,000 rpm離心1 min,棄廢液。
9、 再次12,000 rpm離心2 min,將離心柱置于新的離心管中,并打開離心柱蓋,于室溫或37 ℃恒 溫箱放置5~10min,
直至無明顯乙醇味。
10、 在硅基質膜*加入50~200 μl Elution Buffer或雙蒸水(事先預熱55~65 ℃),置于室 溫2 min,12,000 rpm離2 min。
所得液體即為基因組DNA溶液。
北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司 - 主營產品: prospec一級代理,實驗室常用離心機,Fisher一級代 ...
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