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北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司
中級會員·11年您現在的位置： 北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司>>鼎國昌盛>> NEP062鼎國自產 動物組織 DNA 提取試劑盒
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產品簡介
產品介紹
鼎國自產 動物組織 / 細胞 / 血液基因組 DNA 提取試劑盒 ；350元
純化效果檢測
取2-5μl得到的DNA產物，0.7%agarose電泳檢測DNA分子的完整性和紫外分光光度計檢測濃度和純度。
DNA在260nm處有吸收峰，檢測時應該使OD260值在0.1到1.0之間數值較準確。
OD260為1時大概相當于50μg/ml雙鏈DNA，40μg/ml單鏈DNA。
核酸濃度（μg/ml）=OD260×50×稀釋倍數。
OD260/OD280的值應該為1.7~2.0。
常見問題分析：
| 常見問題 | 可能原因 | 建議 |
| 柱子堵塞 | 裂解消化不充分 | 適當延長Proteinase K消化時間。 |
| 樣品過多 | 樣品量不要超過說明書所定zui大量；可適當增加Proteinase K的用量 | |
| DNA產量低 | 將沉淀倒入柱子導致柱子堵塞 | 加大轉速和延長離心時間 |
| Wash buffer A、Wash buffer B沒有加無水乙醇 | 按說明書加入無水乙醇 | |
| 洗脫效率低 | 洗脫液使用前于55-65℃預熱；洗脫液pH值不合適，應保證在7.5~8.5 | |
| 樣品裂解不* | 適當延長裂解時間。 | |
| 樣品不夠新鮮 | 盡量使用新鮮樣品 | |
| DNA純度低 | 消化不* | 樣品量不要超過規定范圍；延長消化時間，使樣品充分消化 |
| 洗滌不當 | 嚴格按照說明書步驟洗脫 | |
| 乙醇未除干凈 | 適當延長晾干時間，使乙醇充分揮發 |
產品簡介：
本試劑盒采用自主研發的*裂解液和酶相結合的方法裂解材料，具有效率高、性能穩定、
重復性高、速度快等特點。材料被裂解并、經蛋白酶K消化后，DNA在高鹽低pH的條件下，
與硅基質膜特異性結合，在低鹽高pH值條件下，吸附的DNA被洗脫下來。
本試劑盒適用于各種動物組織、動物細胞和血液基因組DNA的提取。
提取的基因組DNA可以直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學實驗。
組成：
| 成分 | 50次 | 注意事項 |
| RNase A | 0.5 ml | -20℃保存 |
| Proteinase K | 0.5 ml | -20℃保存 |
| Lysis Buffer A | 35 ml | 室溫低時可能有白色沉淀產生，加熱溶解即可 |
| Lysis Buffer B | 25 ml | |
| Wash buffer A | 27 ml | 用前加入18 ml 無水乙醇，充分混勻 |
| Wash buffer B | 16 ml | 用前加入64 ml無水乙醇，充分混勻 |
| Elution Buffer | 10 ml | |
| 離心柱 | 50個 | 單個zui大吸附量20 μg |
| 紅細胞裂解液 | 50ml | 4℃ |
可選試劑
| 編號 | 品名 | 規格 | 價格 |
| NEP033 | 紅細胞裂解液 | 100ml | 40.00 |
實驗前試劑準備
Wash buffer A中加入18 ml 無水乙醇，充分混勻。
Wash buffer B中加入64 ml無水乙醇，充分混勻。
儲存條件： 請按照上表中注意事項的條件保存，其他未說明的可常溫或4度保存。
步驟：
1、樣品處理
全血：取50-300 μl全血，加入3倍體積的紅細胞裂解液，震蕩混勻，12000rpm離心1min，
去上清。加入600 μl Lysis Buffer A，震蕩混勻。
禽血：加入10-100 μl禽血，直接加入600 μl Lysis Buffer A，顛倒混勻。
動物組織：取20-50mg動物組織，液氮研磨或勻漿，加入100 μl PBS重懸樣品，
然后加入到準備好的600 μl Lysis Buffer A，振蕩混勻。
動物細胞：離心收集105-106個培養細胞，加入100 μl PBS重懸細胞，
加入600 μl Lysis Buffer A，震蕩混勻。
2、 加入10 μl Proteinase K，60 ℃水浴20 min～40 min，其間顛倒混勻數次。
如需消化RNA,可待樣品裂解*后加入10 μl RNase A，混勻，室溫放置10 min。
若加入樣品較多，可適當延長水浴時間，適量增加Proteinase K的量，按比例增加
Lysis Buffer A和Lysis Buffer B量。
3、 加入400 μl Lysis Buffer B，漩渦震蕩30 s。
4、 12,000 rpm離心5 min，將上清轉入離心柱中，靜置2 min。
上清可能出現少量白色漂浮物，此為未消化*的細胞和蛋白質。
5、 12,000 rpm離心1 min，棄廢液。
6、 加入700 μl Wash buffer A（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm離心 1min，棄廢液。
7、 加入700 μl Wash buffer B（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇）， 12,000 rpm離 心 1min，棄廢液。
8、 加入500 μl Wash buffer B，12,000 rpm離心1 min，棄廢液。
9、 再次12,000 rpm離心2 min，將離心柱置于新的離心管中，并打開離心柱蓋，于室溫或37 ℃恒 溫箱放置5~10min，
直至無明顯乙醇味。
10、在硅基質膜中央加入50～200 μl Elution Buffer或雙蒸水(事先預熱55～65 ℃)，置于室 溫2 min，12,000 rpm離2 min。
所得液體即為基因組DNA溶液。
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