聯(lián)系電話
北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司
中級會員·11年
- 聯(lián)系人：
- 譚柳
- 電話：
- 010-62210403
- 手機：
- 13146220038
- 傳真：
- 86-010-89756821
- 地址：
- 北京昌平區(qū)北七家鎮(zhèn)東沙工業(yè)園384號
- 個性化：
- www.dingguocs.com
- 手機站：
- m.dingguocs.com
- 網(wǎng)址：
- www.dingguocs.com
掃一掃訪問手機商鋪
用于快速缺失內(nèi)源性人蛋白的可選擇的一步PCR介導(dǎo)的降解因子整合方法
科羅拉多大學(xué)醫(yī)學(xué)院科學(xué)家Ryan M. Sheridan和David L. Bentley開發(fā)了一種選擇性的基因盒，它采用CRISPR/Cas9基因編輯器使內(nèi)源性的人蛋白的C端標(biāo)記大腸桿菌二氫葉酸還原酶（eDHFR）降解因子。這個基因盒可以利用框內(nèi)自我剪切2A多肽和嘌呤霉素抗性基因方法進行率正確整合。PCR擴增供體的eDHFR基因盒片段，每個片段末端帶有100bp同源片段，它們通過以向?qū)?/span>RNA為目標(biāo)的可以切割3’端開放性閱讀框的雙鏈DNA同源定向修復(fù)的方法被整合。據(jù)此原理，Ryan M. Sheridan和David L. Bentley生成了含有eDHFR降解因子標(biāo)簽的三個內(nèi)源性蛋白的細(xì)胞。當(dāng)從培養(yǎng)基中去除抗生素甲氧芐氨嘧啶時，在2-4小時就缺失了90%以上每個帶有eDHFR標(biāo)簽的內(nèi)源性蛋白，這種缺失可以通過再次加入甲氧芐氨嘧啶得到恢復(fù)。嘌呤霉素的選擇性可以利用100bp同源性片段率回收框內(nèi)降解因子融合體。該方法可以適用于生成全基因組范圍的突變細(xì)胞庫。
原文：
Ryan M. Sheridan and David L. Bentley, Selectable one-step PCR-mediated integration of a degron for rapid depletion of endogenous human protein, BioTechniques 60:69-74 (February 2016)
