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中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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土壤脲酶檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

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土壤脲酶檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

可見(jiàn)分光光度法

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

S-UE能夠水解尿素,產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機(jī)物質(zhì)含量、全氮和*氮含量呈正相關(guān)。土壤脲酶活性反應(yīng)了土壤的氮素狀況。

利用靛酚藍(lán)比色法測(cè)定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:甲苯10ml×1瓶,4℃保存;(自備)

試劑二:粉劑×1瓶,臨用前加入20ml蒸餾水,充分溶解待用,4℃保存;

試劑三:液體65ml×1瓶,4℃保存;

試劑四A液:液體1ml×1瓶,4℃保存;試劑四B液:液體4ml×1瓶,4℃保存;臨用前將A液倒入B液中混合,待用;4℃保存一周

試劑五:液體5ml×1瓶,4℃保存;

操作步驟:  

  • 培養(yǎng)  

試劑名稱

測(cè)定管

對(duì)照管

風(fēng)干土樣(g)

0.25

0.25

試劑一(μl

125

125

振蕩混勻,使土樣全部濕潤(rùn),室溫放置15min

試劑二(μl

625

 

蒸餾水(μl

 

625

試劑三(μl

1250

1250

混勻,放入37水浴培養(yǎng)24h后,10000g常溫離心10min,取上清液。

  • 將培養(yǎng)結(jié)束的上清液稀釋10倍(取0.1ml上清液,加入0.9ml蒸餾水)。

 

 

 

3、測(cè)氨量

 

測(cè)定管

對(duì)照管

稀釋后的上清液(μl

400

400

試劑四(μl

80

80

試劑五(μl

60

60

充分混勻,室溫放置20min

蒸餾水(μl

460

460

混勻,578nm處蒸餾水調(diào)零,測(cè)A值,ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

脲酶活力的計(jì)算:

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=0.0915x+0.0373;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/ml),y為吸光值。

單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1μgNH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。

脲酶活力(U/g 土樣)=(ΔA-0.0373)÷0.0915×10×V反總÷W÷T=874×(ΔA-0.0373)

10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時(shí)間,1d;V反總:反應(yīng)體系總體積:2ml;W:樣本質(zhì)量,0.25g。

 

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