徠卡熒光顯微鏡的主要組成部分
徠卡熒光顯微鏡依據光路可分為透射式和落射式兩種,現今
徠卡新型熒光顯微鏡多為落射式熒光顯微鏡,某些徠卡大型熒光顯微鏡中兼有透射利落射兩種方式的激發光路。①透射式熒光顯微鏡,激發光源是從標本下方經過聚光鏡穿過標本材料來激發熒光,適于觀察對光可適的標本。其優點是低倍鏡時熒光強,而缺點是隨放大倍數增加其熒光減弱。②落射式徠卡熒光顯微鏡,是近代發展起來的新式熒光顯微鏡,其激發光源是從標本上方經過套在物鏡外用的特殊的垂直照明器,從物鏡周圍落射到標本上,光路中需加上一個雙色束分離器,它與光軸呈45。角,激發光被反射到物鏡中,并聚集在樣品上,樣品所產生的熒光以及由差玻片表面等反射的激發光同時進入物鏡,即用同一物鏡作為聚光器和收集熒光的物鏡。由于不必透過載坡片,減少了激發光的無效吸收,提高了對激發光的利用率。如換用不同的激發濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊,可滿足不同熒光反應產物的需要。
徠卡熒光顯微鏡的優點是視野照明均勻,成像清晰,放大倍數愈大,熒光愈強。這里我們主要介紹落射式熒光顯檄鏡的構造。
(一)光源
受檢標本所能發出的熒光強度通常取決于激發光源的強度。由于熒光物質的量子效規格,由啟動裝置校制,其使用壽命與啟動次數和工作時間密切相關o
(二)濾片系統
濾片的正確選擇是獲得良好熒光觀察效果的重要條件,包括激發濾片、阻斷濾片熱濾片和紫外線吸收濾片等。
1.激發濾片激發濾片裝在光源和標本之間的濾片滑板中,其作用是吸收光源中波良較長的可見光,使短于一定波江的光波通過,作為徠卡熒光顯微鏡的激發光。各類徠卡熒光顯微鏡使用的激發濾片型號、名稱均不相同,但大都根據其光譜的基本色調命名,如W(紫外光)、B(藍色)、Dv(藍紫色)等,使用時應根據觀察的熒光所需要的激發波長,選擇某一種濾片并推入光路。
2.阻斷濾片阻斷濾片又稱吸收濾X,是裝在物鏡和目鏡之間的光路滑板中,其作用是吸收視野內末被標本吸收的激發光,允許標本內物質發射的熒光通過,以獲得清晰的熒光圖像和保護觀察吝的眼睛。阻斷濾片多采用數字作為標志,吸收短于濾片標記數字的波長光,允許長于標記數字的波長光通過。在進行熒光染色觀察時,激發濾片和阻斷濾片必須聯合應用,要根據使用的熒光素有效吸收波長的不同,選用適當的濾片,即激發濾片允許某種波長范圍的激發光通過,則相應的使用能吸收和阻斷該波長范圍的阻斷濾片。