二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶試劑盒是植物光合作用中固定 CO2 的關(guān)鍵酶，同時(shí)參與植物 光呼吸代謝途徑，制約著碳素向 Calvin 循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流，作為一種能夠催化羧化反應(yīng)和加氫 反應(yīng)的雙功能酶，其活性的大小對(duì)光合速率的研究具有重要意義。 Rubisco 可催化核酮糖-1,5-二磷酸（RuBP）和 CO2 結(jié)合生成 3-磷酸甘油酸（PGA），3-磷酸甘油 酸可進(jìn)一步在 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的催化作用下生成甘油醛-3-磷酸，反應(yīng)過程 中伴隨著 NADH 氧化生成 NAD+，NADH 在 340 nm 處有特征吸收峰，通過測(cè)定 340 nm 處吸光度的 下降速率即可表征 Rubisco 活性。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶試劑盒注意事項(xiàng)為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失，測(cè)定前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書（以實(shí)際收到說明書內(nèi)容為準(zhǔn)），確 認(rèn)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備是否充分，操作步驟是否清楚，且務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)測(cè)定， 過程中問題請(qǐng)您及時(shí)與工作人員聯(lián)系。

測(cè)定過程中所需要的儀器和試劑：紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研缽 /勻漿器、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。

吸光值測(cè)定：①充分混勻并立即開始計(jì)時(shí)，測(cè)定 20 s（總時(shí)間）時(shí) 340 nm 處吸光值，記為 A1 測(cè) 定和 A1 空白；②25℃恒溫準(zhǔn)確反應(yīng) 300 s，測(cè)定 320 s（總時(shí)間）時(shí) 340 nm 處吸光值，記為 A2 測(cè)定 和 A2 空白；③計(jì)算 ΔA 測(cè)定=A1 測(cè)定-A2 測(cè)定，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白，ΔA=ΔA 測(cè)定-ΔA 空白。 注：空白組只需測(cè)定 1-2 次。