1 適用范圍
    本標(biāo)準(zhǔn)適用于氨基酸分析儀測(cè)定谷物籽粒中氨基酸含量的樣品前處理。

2 方法原理
    谷物籽粒中的氨基酸，系按一定順序結(jié)合成不同類型的肽和蛋白質(zhì)，因而在測(cè)定前
要用一定濃度的酸使蛋白質(zhì)中肽鍵斷裂，水解成多種氨基酸后，用氨基酸分析儀測(cè)定。
由于色氨酸在酸性溶液中水解時(shí)易被破壞，須用堿水解。

3 儀器設(shè)備
3.1 分析天平：感量 0.0001g。
3.2 實(shí)驗(yàn)室用粉碎機(jī)。
3.3 噴燈。
3.4 真空泵。
3.5 真空規(guī)。
3.6 恒溫干燥箱。
3.7 水解管：用九五料玻璃制的球形管或圓底試管。體積 15-20ml。
3.8 聚四氟乙烯管:φ10×100mm。
3.9 玻璃試管：φ15×180mm。
3.10 濃縮器（可控溫，減壓）或真空干燥器。
3.11 容量瓶：25ml。

4 試劑
    除注明者外均為分析純。配制試劑均用去離子水，電導(dǎo)率大于 1m,-1。
4.1 6mol/L鹽酸：鹽酸（GB622—77），優(yōu)級(jí)純，與水按 1.1混合。
4.2 4mol/L氫氧化鋰：用水溶解168.8g氫氧化鋰（Q/HG12—325—83），稀釋至1000ml。
4.3 pH2.2緩沖液：19.6g檸檬酸三鈉（HG3—1298—80）用水溶解后，加入 16.5ml鹽
酸（GB622—77，優(yōu)級(jí)純），5ml25%硫代雙乙醇，1g苯酚（HG3—1165—78），zui后定
容至 1000ml。
4.4 pH4.3緩沖液：14 71g檸檬酸三鈉（ HG 3—1298—80）和2.92g氯化鈉（GB1266—77），
10.50g檸檬酸（HG3—1108—81），溶解在 500ml水中，再加入 5ml25%硫
代雙乙醇，0.1ml辛酸，zui后定容至 1000ml。
4.5 冷凍劑：液氮或干冰加丙酮（或加乙醇）。

5 試樣制備
5.1 取有代表性的樣品，用四分法分取 25g左右，揀去雜質(zhì)，帶殼籽粒進(jìn)行脫殼。
5.2 將樣品放在60-65 恒溫干燥箱中。干燥 8h左右冷卻后在粉碎機(jī)中碾碎，全部通
過(guò)孔徑為 0.25mm的篩子，充分混勻后裝入磨口瓶中備用。

6 處理方法
6.1 酸水解步驟
6.1.1 稱樣
    稱取樣品 30.5mg，準(zhǔn)確至 0.1mg，置于水解管中，同時(shí)另稱樣品按 GB3523—83
《谷類、油料作物種子水分測(cè)定法》，測(cè)定水分含量。
6.1.2 水解
6.1.2.1 在水解管內(nèi)加入 6mol/L鹽酸 10ml，在距管口 2cm左右處，用噴燈灼燒并拉一
*。再將管子放入冷凍劑中，冷卻至溶液呈固體后取出，接在真空泵的抽氣管上，使
減壓至 7Pa（≤5×10.2mmHg）后封口。
6.1.2.2 將封好口的水解管放在 110±01℃ 的恒溫干燥箱內(nèi)，水解 22-24h后，取出冷
卻。
6.1.2.3 打開水解管，將水解液定量轉(zhuǎn)移到 25ml容量瓶?jī)?nèi)，定容過(guò)濾，吸取濾液 1ml，
用旋轉(zhuǎn)濃縮器（45-50℃）或置于真空干燥器內(nèi)真空干燥，殘留物用 1-2ml去離子水
溶解蒸干，如此反復(fù)進(jìn)行 1-2次，zui后一次蒸干后，加 pH2.2緩沖液溶解，供儀器測(cè)
定。
6.2 堿水解步驟
6.2.1 稱樣
    稱取樣品 60±5mg準(zhǔn)確至 0.1mg，置于聚四氟乙烯管內(nèi)，同時(shí)按 GB3523—83測(cè)定
水分。
6.2.2 水解
6.2.2.1 在聚四氟乙烯管內(nèi)加入 4mol/L氫氧化鋰 1ml，使樣品均勻濕潤(rùn)，然后把管子
放入玻璃試管中，在玻璃管上端，離聚四氟乙烯管 4-5cm處，用噴燈灼燒并拉一*，
再放到冷凍劑中，冷卻至溶液呈固體后取出，接在真空泵的抽氣管上，減壓至 7Pa（≤
5.10-2mmHg）后封口。
6.2.2.2 把管子放在 110±1℃ 的恒溫干燥箱內(nèi)水解 20h，取出冷卻，將水解液定量轉(zhuǎn)移
到 25ml容量瓶?jī)?nèi)，用 6mol/L鹽酸中和后，再用 pH4.3的緩沖液定容，過(guò)濾后供測(cè)定色
氨酸用。

                                  附 錄 A
                         氨基酸分析儀測(cè)定的結(jié)果計(jì)算
                                 （補(bǔ)充件）
A.1 計(jì)算公式
                           A
某種氨基酸，%（干基） =---------×10的負(fù)6次方×25×100
                m（1-H）
式中： A——測(cè)得的某種氨基酸在每毫升水解液中的含量，mg；
       m——樣品的質(zhì)量，mg；
       H——樣品的水分百分率；
       25——稀釋倍數(shù)。
A.2 結(jié)果表示
    兩個(gè)平行樣品的測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)點(diǎn)后有效數(shù)字兩位。
A.3 結(jié)果的允許差
    兩個(gè)平行測(cè)定值相對(duì)差不得大于 8%。