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顯微鏡小課堂 | 科勒照明技術（上）
充分利用科勒照明技術
提供均勻的照明和優異的標本反差（上）
在August Köhler（1866年–1948年）發明了現在被稱為科勒照明的新型照明方法以前，臨界照明一直是顯微鏡照明的主導技術。但是，在使用臨界照明時，明亮的照明光源所產生的燈絲像會落在與標本相同的平面上，zui終的成像里出現的燈絲像會導致標本照明不均勻，產生眩光和偽影。而科勒照明技術使光源像不聚焦到標本上，這樣能夠均勻地照明標本，解決了偽影問題。
標本照明不理想，會妨礙正確的觀察，這就需要使用科勒照明，這種情況今天仍然適用。無論是透射光路，還是反射光路，科勒照明都能為明場、暗場，以及各種相差顯微術提供均勻的標本照明。科勒照明給成像帶來了均勻的照明、高的分辨率和良好的標本反差。
用反射光顯微鏡拍攝的圖像。上圖未使用科勒照明獲取圖像；下圖使用科勒照明獲取圖像。
怎樣設置并使用科勒照明？
1/透射光顯微鏡術：
科勒照明需要顯微鏡的若干個光學元件在光源與標本之間協同發揮作用。這些元件包括集光透鏡、視場光闌、聚光鏡光闌和聚光鏡透鏡。集光透鏡的作用是對來自光源的光線進行會聚，并把它聚焦到聚光鏡光闌所在的平面。然后聚光鏡的透鏡再把光線投射到標本上。
調節視場光闌，把標本平面上的視場光闌圖像設置到略大于標本的成像區域，與目鏡視場光闌中看見的標本圖像部分相對應。由于視場光闌、標本和目鏡視場光闌都位于共軛的同一個像平面，因此這種調節就能使照明光線*充滿目鏡視野，同時又能利用目鏡視場光闌zui大限度地阻擋掉多余的照明光線。
2/反射光顯微鏡術：
不透明標本，比如金屬、礦石、陶瓷、聚合物、半導體（例如未加工的硅、晶圓、集成電路）、礦渣、煤、塑料和涂料的照明可以選用反射光顯微鏡術，或落射光顯微術。
反射光顯微術中需要用于設置科勒照明的關鍵光學元件的位置與透射光顯微術的正好位置相反。它的聚光鏡孔徑光闌靠近光源，而視場光闌則靠近標本。在反射光顯微術中，物鏡具有雙重功能——光路向下時，物鏡的作用相當于已正確調整的聚光鏡，控制投射到標本上的光線的角度。光路向上時，物鏡的數值孔徑（NA）決定了其捕獲來自標本的反射光線的角度。所有情況與透射光顯微術都相同，NA值越高，物鏡的分辨率越高，標本的清晰度也越好。（未完待續，敬請關注下期）
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