| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | MH-S小鼠肺泡巨噬細胞系 | |||
| 細胞別稱 | MHS；MH-S小鼠肺泡巨噬細胞 | |||
| 種屬來源 | 小鼠 | |||
| 年齡 | 7周齡 | |||
| 組織來源 | 肺 | |||
| 生長特性 | 半貼壁生長 | |||
| 細胞形態 | 圓形有部分貼壁 | |||
| 背景介紹 | MH-S細胞系是通過SV40轉化富含粘附細胞的小鼠肺泡巨噬細胞群而獲得的 | |||
| 細胞代數 | 10代以內 | |||
| 生物安全等級 | 2 | |||
| 細胞規格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 保藏機構 | ATCC; CRL-2019 BCRC; 60419 ECACC; 95090612 | |||
| 培養基 | 90%1640+10% FBS+0.05 mM 2-mercaptoethanol + PS | |||
| 培養條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 抗原表達情況 | CD11b (Mac-1); Class II antigens (I-A); T antigen | |||
| 基因表達情況 | interleukin 1 (IL-1) | |||
| 細胞貨期 | 現貨，1周左右 | |||
| 發貨方式 | 復蘇發貨（免運輸費用）/ 凍存發貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應限制 | 于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 初步平衡 | 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，放37度培養箱內靜置培養2-4h，以便穩定細胞狀態 | 無須平衡，直接放入-80冰箱（不超過一周）或者液氮罐保存，建議盡早復蘇 | ||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養 | 第二天換液并檢查細胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到6cm培養皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a、收集細胞培養上清：抽出瓶中的培養基和懸浮的細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清，細胞重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的培養基）。 b、剩下貼壁的細胞，用不含鈣、鎂離子的PBS輕輕潤洗細胞1次。 c、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-3 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，加少量培養基終止消化。 d、按3mL/瓶補加培養基，輕輕打勻吹下細胞后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。 將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養中。（次傳代建議一個滿的T25傳一個10cm或者2個T25）。 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 | ||
| 注意事項 | 懸浮細胞收貨注意事項： 1、收貨時需鏡下拍照（看密度、狀態） 2、靜置后需鏡下拍照（看整體密度） a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養 b.如密度50%-80%，建議換液培養，隔天觀察密度 c.如密度90%，建議傳代 3、換液及傳代處理前，培養瓶豎著放置至少半小時（使細胞沉到瓶底）；收集上清，必須將瓶內所有培養基（70ml）全部收集！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集！離心轉速為1000rpm，5min。 4.運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。 5.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。 | 1.收貨時若發現干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存； 2.為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞。 | ||
| 備注：客戶在細胞培養過程中，有任何技術問題可以技術服務電話： 按 2，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞密度 | 待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數。 b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案 | |||
| 四、售后服務 | ||||
| 重發標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發； 2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發； 3.收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發； 4.常溫發貨的細胞靜置 2 小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇 2 天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發； 5.常溫發貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇 2 天后，出現污染，經核實后，重發； 6.細胞活性問題，請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發 | 1.客戶操作造成細胞污染，不重發； 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發； 3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發； 4.細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前 3 天的細胞狀態照片，不重發； 5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發； 6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發； 7.視具體情況而定。 | |||
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