一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
細(xì)胞名稱 | Kasumi-1人急性原粒細(xì)胞白血病細(xì)胞(STR鑒定正確) | |||
細(xì)胞別稱 | KASUMI-1; Kasumi 1; KASUMI1; Kasumi1;人急性淋巴白血病細(xì)胞;人急性原粒細(xì)胞白血病細(xì)胞;人急性髓母白血病細(xì)胞 | |||
種屬來(lái)源 | 人 | |||
年齡性別 | 男;7歲 | |||
組織來(lái)源 | 外周血,急性原粒細(xì)胞白血病 | |||
生長(zhǎng)特性 | 懸浮生長(zhǎng) | |||
細(xì)胞形態(tài) | 原粒細(xì)胞 | |||
重要提醒 | 收貨時(shí)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物中有部分死細(xì)胞和細(xì)胞碎片,此為正常現(xiàn)象。該細(xì)胞會(huì)有輕微聚團(tuán),輕輕吹開(kāi)即可。細(xì)胞密度應(yīng)保持在合適范圍,不能過(guò)稀。 | |||
細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
背景介紹 | Kasumi-1細(xì)胞具有人急性淋巴白血病細(xì)胞的典型特征,是研究人急性淋巴白血病的材料。Kasumi-1細(xì)胞是一個(gè)帶有8:21號(hào)染色體轉(zhuǎn)位的白血病細(xì)胞株,這個(gè)轉(zhuǎn)位使得AML1基因和ETO(或稱MTG8)基因串聯(lián),使融合基因AML1-ETO(也稱作AML1-MTG或RUNX1-CBF2T1)的表達(dá)升高,因而細(xì)胞產(chǎn)生嵌合的AML1-ETO蛋白。這個(gè)蛋白下調(diào)CEBPA mRNA、蛋白和DNA的結(jié)合活性,而這種結(jié)合對(duì)粒性白細(xì)胞的分化是重要的。Kasumi-1細(xì)胞建立于一位急性白血病患者的外周血,Kasumi-1細(xì)胞髓過(guò)氧化物酶陽(yáng)性,顯示其髓性成熟的形態(tài)。增生試驗(yàn)顯示,培養(yǎng)的Kasumi-1細(xì)胞對(duì)IL-3、IL-6、G-CSF(粒細(xì)胞集落刺激因子)、GM-CS(粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子)有響應(yīng),但對(duì)IL-1和IL-5沒(méi)有響應(yīng)。在體外液體培養(yǎng)中分別加入二甲亞砜、G-CSF、IL-5,也沒(méi)有觀察到粒性或嗜酸性細(xì)胞的成熟。Kasumi-1細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,加入佛波酯可以看到誘導(dǎo)出的巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞。 | |||
STR位點(diǎn) | Amelogenin:X,Y;D5S818: 9,11;D13S317: 11,13;D7S820: 8,11;D16S539: 9,12;vWA: 14;THO1: 6,9;Amelogenin: X;TPOX: 8,9;CSF1PO: 10,12 | |||
STR鑒定圖片 | ||||
生物安全等級(jí) | 1 | |||
細(xì)胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
支原體檢測(cè) | 無(wú) | |||
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2724 DSMZ; ACC-220 | |||
培養(yǎng)基 | RPMI-1640+20% FBS+1%GlutaMAX-1+1%Sodium Pyruvate丙酮酸鈉+PS | |||
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ | |||
倍增時(shí)間 | ~48-72 hours | |||
凍存條件 | 無(wú)血清凍存液,液氮儲(chǔ)存 | |||
細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨,1周左右 | |||
運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨(T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用)/ 凍存發(fā)貨(需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用) 順豐快遞 | |||
供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究,絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
特別說(shuō)明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主 | |||
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后,需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
傳代比例 | 傳代建議1:2傳代 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
傳代方法 | 方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心3-5min分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 | ||
注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。 | 1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存; 2.為保證細(xì)胞的高存活率,收到產(chǎn)品后,請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。 | ||
到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后,首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā),細(xì)胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照(當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照),記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 | |||
備注:客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,有任何技術(shù)問(wèn)題可以技術(shù)服務(wù)電話: 按 2,我們隨時(shí)給予解答。 | ||||
三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
凍存液配方 | 無(wú)血清凍存液,液氮儲(chǔ)存 | |||
細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
凍存方法 | a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無(wú)菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加 1 mL血清重懸細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
四、售后服務(wù) | ||||
重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題,細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā); 2.收到細(xì)胞未開(kāi)封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā); 3.收到細(xì)胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā); 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā); 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時(shí)并且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā); 6.細(xì)胞活性問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā); 7.視具體情況而定。 | |||
不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā); 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā); 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā); 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā); 5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的,不重發(fā); 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,不重發(fā); 7.視具體情況而定。 |