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NADP磷酸酶(NADPase)測試盒
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- 上海研生實業有限公司
- 312 - 588 （具體成交價以合同協議為準）
- 2024-09-02 14:01:18
- 上海市
- 國產
- 1065
【詳細說明】
NADP磷酸酶(NADPase)測試盒
商品詳情：
測定意義：
NADPase主要存在于植物組織中，是生物體內催化NADP+降解為NAD+的酶，與NADK一起調控NAD和NADP之間的平衡。
貨號 | 規格 | 檢測方法 |
YSH3227 | 100管/96樣 | 微量法 |
YSH3227-1 | 50管/48樣 | 可見分光光度法 |
測定原理：
NADPase能夠催化NADP+水解為NAD+和無機磷的反應，通過測定無機磷的量來測定NADPase活性。
所需的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
樣品中AA提取：
1.按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行室溫勻漿，然后轉移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來水冷卻后，8000g，，4℃離心10min，上清液置冰上待測。
2.細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3.血清等液體：直接檢測。
計算公式如下：
1、血清（漿）LAP活力的計算:
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA
2、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；2000：細菌或細胞總數，2000萬。
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注意事項：
1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨用前配制，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內使用完畢。
2. 為保證實驗結果的準確性，需先取1-2個樣做預實驗，如果測定的吸光值過高（高于2.5），用蒸餾水稀釋后再測定。
3. 與茚三酮反應在570nm處無吸收峰，因此，570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。
4．檢出限為100μmol/L。