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人基質金屬蛋白酶抑制因子-1ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標本:血清或血漿
試驗原理:
TIMP-1 試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知TIMP-1 濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將TIMP-1 和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中TIMP-1 的濃度呈比例關系。
自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人基質金屬蛋白酶抑制因子-1ELISA 檢測試劑盒
操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人基質金屬蛋白酶抑制因子-1ELISA 檢測試劑盒
操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
人基質金屬蛋白酶抑制因子-1ELISA 檢測試劑盒
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的TIMP-1 標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的TIMP-1 含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍:0-800ng/ml
4、敏感度: 1.0 ng/ml
PLGF(Placenta growth factor) 胎盤生長因子抗體 0.2ml
PMP-22(Peripheral Myelin Protein) 外周髓鞘蛋白-22 0.1ml
Rabbit anti-mouse IgG/FITC 熒光素標記兔抗小鼠IgG 0.3ml
Rabbit anti-mouse IgM/FITC 熒光素標記兔抗小鼠IgM 0.3ml
Goat anti-human Fibrinogen/FITC 熒光素標記羊抗人纖維蛋白原 0.3ml
Rabbit anti-horse IgG/FITC 熒光素標記兔抗馬IgG 0.3ml
PMP-22(Peripheral Myelin Protein) 外周髓鞘蛋白-22 0.2ml
PMS2(Post Meiotic Segregation Increased 2) 腫瘤錯配修復基因PMS2抗體 0.2ml
Podoplanin Protein 平足蛋白抗體 0.2ml
Pokemon/ZBTB7A “撲克蒙”蛋白又稱“波克曼”蛋白抗體 0.1ml
Pokemon/ZBTB7A “撲克蒙”蛋白又稱“波克曼”蛋白抗體 0.2ml
Polycystin 1(Autosomal dominant polycystic kidney disease protein 1) 多囊腎蛋白1抗體 0.2ml
Rabbit anti-Meiiones Unguiculataus Milme-Edwauds/FITC 熒光素標記兔抗長爪沙鼠IgG 0.3ml
Avidin/FITC 熒光素標記親合素 0.1ml
Avidin/FITC 熒光素標記親合素 1ml
Streptavidin/FITC 熒光素標記鏈霉親和素 0.3ml
Polycystin 2(polycystic kidney disease 2)human, mo, rat, dog, bovine, chicken 多囊腎蛋白2抗體 0.2ml
PP-1 蛋白磷酸酯酶-1抗體 0.1ml
PP-1 蛋白磷酸酯酶-1抗體 0.2ml
PP-2A(protein phosphatase 2A) 蛋白質磷酸酶-2A抗體 0.2ml
PP-2A(protein phosphatase 2A catalytic subunit) 蛋白質磷酸酶-2A抗體 0.1ml
PP-2A(protein phosphatase 2A catalytic subunit) 蛋白質磷酸酶-2A抗體 0.2ml
Donkey rabbit/FITC 熒光素標記驢抗兔IgG 0.3ml
Donkey Goat IgG/FITC 熒光素標記驢抗羊IgG 0.3ml
PP2Ac 磷酸酯酶-2Ac抗體 0.1ml
PP2Ac 磷酸酯酶-2Ac抗體 0.2ml
PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor;PPAR-beta) D型-過氧化酶活化增生受體抗體 0.2ml
PPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor-gamma) 過氧化酶活化增生受體γ抗體 0.1ml
PKB/Akt1 蛋白激酶B(兔來源抗體) 0.2ml
phospho-PKB(pSer473)(p-AKT PKB) 抗磷酸化蛋白激酶B抗體(絲氨酸磷酸化位點:473) 0.1ml
rec Protein G/FITC 熒光素標記重組純化蛋白G 0.3ml
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