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研域(上海)化學試劑有限公司

48T人超敏C反應蛋白ELISA試劑盒安徽,六安

時間:2012-4-28閱讀:1014
人超敏C反應蛋白ELISA試劑盒安徽,六安
用 途:
人hsCRP ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、緩沖液中細胞上清液及各種體液中的hsCRP 。本試劑盒可以檢測天然和重組的hsCRP 。本試劑盒于科研、而非用于臨床診斷。
人超敏C反應蛋白ELISA試劑盒安徽,六安
試驗原理:
人hsCRP 試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知hsCRP 濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將hsCRP 和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中hsCRP 的濃度呈比例關系。
人超敏C反應蛋白ELISA試劑盒安徽,六安
試劑盒內容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型
塑料膜板蓋1塊半塊即用型
標準品:8.0ug/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進行稀稀
空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型
標準品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型
生物素標記的抗hsCRP抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型
親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型
洗滌緩沖液1瓶(60ml)1瓶(30ml)按說明書進行稀釋
底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
 
自備材料
1.蒸餾水。
2.加樣器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
3.振蕩器及磁力攪拌器等。
 
安全性
1.此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性,但沒有實驗室可*保證此血制品不會傳染肝炎、AIDS或其它傳染病,依據當地的安全條例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。
2.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
3.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
4.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
 
 
操作注意事項
1.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7.底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
 
樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
試劑的準備
1.標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
8.0 ug/ml(6號標準品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
4.0 ug/ml(5號標準品)100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.0 ug/ml(4號標準品)100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
1.0 ug/ml(3號標準品)100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0.5 ug/ml(2號標準品)100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0.25 ug/ml(1號標準品)100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ug/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
 
2.洗滌緩沖液(20×)的稀釋:蒸餾水20倍稀釋。
 
操作步驟
1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育15分鐘。避免光照。
8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9.在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
建議使用的實驗方案
標準品濃度(ug/ml)
A8.08.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B4.04.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C2.02.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D1.01.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E0.50.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F0.250.25樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
 
結果分析
以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的hsCRP 標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的hsCRP 含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
 
局限
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。
 
試劑盒性能
1.靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2.特異性:不與人其它細胞因子反應。
3.重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
 
人超敏C反應蛋白ELISA試劑盒安徽,六安
B6081-25g4-Bromoacetophenone 4-溴苯乙酮[99-90-1]
B6423-25g2-Bromoadamantane 2-溴金鋼烷[7314-85-4]
B2724-25g4-Bromoaniline 4-溴苯胺[106-40-1]
B6179-500ml3-Bromobenzaldehyde 間溴苯甲醛[3132-99-8]
B6459-25g4-Bromoquinoline 4-溴喹啉[3964-04-3]
B6119-5gBromothymol blue, free acid 溴百里酚藍[76-59-5]
B2171-500mlBromobenzene 溴苯[108-86-1]
B6424-100g3-Bromobenzoic acid 間溴苯甲酸[585-76-3]
B5088-250g4-Bromobenzoic acid 對溴苯甲酸[586-76-5]
B2708-500g1-Bromobutane 1-溴丁烷[109-65-9]
B2711-250g2-Bromobutane 2-溴丁烷[78-76-2]
B6015-50ml2-Bromobutyric acid 2-溴丁酸[80-58-0]
B2726-25g4-Bromo-1-chlorobenzene 4-溴氯苯[106-39-8]
B6425-100g5-Bromo-2-chlorobenzoic acid 5-溴-2-氯苯甲酸[21739-92-4]
 

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