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培養用品的清洗
目前我國細胞培養器皿主要仍使用能反復使用的玻璃器皿,清洗的主要目的為清除雜質和微生物,使在器皿內不殘留任何影響細胞生長的成份。因而在組織細胞培養中清洗和消毒是一項極為重要的環節。
在組織細胞培養中,體外細胞對任何有害物質都非常敏感。微生物產品附帶雜物,上次細胞殘留物及非營養成分的化學物質,均能影響培養細胞的生長。因此對新使用和重新使用的培養器皿都要嚴格*的清洗,且要根據器皿的組成材料不同,選擇不同的清洗方法。
1、玻璃器皿的清洗
組織細胞培養中,使用量zui大的是玻璃器皿,故工作zuizui大的是玻璃器皿的清洗。一般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、侵酸和沖洗四個步驟。清洗后的玻璃器皿僅要求干凈透明無油跡,而且不能殘留任何物質。
(1)浸泡:初次使用和培養使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡,以使附著物軟化或被溶液掉。新的初次使用的玻璃器皿,在生產及運輸過程中,玻璃表面帶有大量的干固的灰塵,且玻璃表面常呈堿性及帶有一些對細胞有害的物質等。新瓶使用前應先用自來水簡單刷洗,然后用稀鹽酸液(5)浸泡過夜,以中和其中的堿性物質。再次使用的玻璃器皿則常附有大量剛使用過的蛋白質,干固后不易洗掉,故用后要立即浸入水中,且要求*浸入,不能留有氣泡或浮在液面上。
(2)刷洗:浸泡后的玻璃器皿一般要用毛刷沾洗滌劑刷洗,以除去器皿表面附著較牢的雜質。刷洗要適度,過度會損害器皿表面光澤度。
(3)浸酸:清潔液是由重鉻酸鉀、濃硫酸和蒸餾水按一定比例配制而成,其處理過程稱為浸酸。清潔液對玻璃器皿無腐蝕作用,而其強氧化作用可除掉刷洗不掉的微量雜質。清潔液去污能力很強。是清洗過程中關鍵的一環。浸泡時器皿要充滿清潔液,勿留氣泡或器皿露出清潔液面。浸泡時間一般為過夜,不應少于6小時。清潔液可根據需要,配制成不同的強度,常用的下列三種:重鉻酸鉀(g)濃硫酸(ml)蒸餾水(ml)(A)強清潔液631000200000B)次強清洗液1202001000(C)弱清潔液100100100
清潔液配制時應注意安全,須穿戴耐酸手套和圍裙,并要保護好面部及身體裸露部分。配制過程中可使重鉻酸鉀溶于水中,然后慢慢加濃硫酸。并不停的用玻璃棒攪拌,使產生的熱量揮發,配制過程中可使重鉻酸鉀溶于水中,然后慢慢加濃硫酸。并不停的用玻璃棒攪拌,使產生的熱量揮發,配制溶液應選擇塑料制品。配成后清潔液一般為棕紅色。
(4)沖洗:玻璃器皿在使用后,刷洗及浸泡后都必須用水充分沖洗。使之盡量不留污染或潔液的殘跡。沖洗用洗滌裝置。即省力、效果又好。如用手工操作,則需流水沖洗十次以上,每天水須灌滿及倒干凈,用蒸餾水清洗3-5次,晾干備用。
2、膠塞的清洗
細胞培養中所用的橡膠制品主要是瓶塞。新購置的瓶塞帶有大量滑石粉及雜質,應先用自來水沖洗,再做常規處理,常規清洗方法是:每次用后立即置入水中浸泡,然后用2%NaOH或洗衣粉煮沸10-20分鐘,以除掉培養中的蛋白質。自來水沖洗后,再用1%稀鹽酸浸泡30分鐘或蒸餾水沖洗后再煮沸10-20分鐘,晾干備用。
3、塑料制品的清洗
塑料自制品現多是采用無毒并已經特殊處理的包裝,打開包裝即可用,多為一次性物品。必要時用2%NaOH浸泡過夜,用自來水充分沖洗,再用5%鹽酸溶液浸泡30分鐘,zui后用自來水和蒸餾水沖洗干凈,晾干備用。
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