不少朋友在為中秋前的zui后一次實驗仔細預備著,而在實驗的過程中大大小小的問題總會遇到一些。今天上午,一位來自上海科研所的客戶孫教師來電與我公司技術專員交流ELISA實驗問題。在交流的過程中,孫教師標明:
“做定量要驗證試劑盒的線性規劃,現在我的盒子線性規劃太窄,線性區間的高點與低點的濃度值比值為16。我檢驗了改動反應方式,將線性規劃略擴寬了一些——線性區間的高點與低點的濃度值比值為32。假設高點往上一個梯度延伸,則R平方就只有0.96(已經是的成果了)。總的來說線性規劃仍是太窄。我參看了其他一些廠家的ELISA定量試劑盒,基本上線性區間的高點與低點的濃度值比值都≥64。我知道,ELISA的信號值規劃窄,但我想線性區間的高點與低點的濃度值比值≥64應該仍是可以的。那么怎樣才能將試劑盒的線性規劃擴寬?"
對此,研域(上海)技術專員分析解說到:試劑盒的線性規劃影響的首要要素應該是抗體本身的性質,其次才是ELISA反應的各種條件。假設在優化了各種反應條件下線性規劃仍是很窄,只能說制的抗體不是很好。而線性規劃的影響有兩個要素,*個可能要素是本身抗體的親和力,親和力越高靈敏度越高,高點與低點比值也就越高,若規范曲線的斜率接近于1,抗體親和力仍是可以的。比值沒有相關規定說一定要高于64。
第二個可能要素是本身抗原的影響。不同的蛋白ELISA其靈敏度都不相同,線性規劃也不同,假設你的項目在某一濃度抵達途徑值,說明這個蛋白與其抗體結合與解離在此濃度下抵達了平衡,改動其他條件也無法增加,除非改用化學發光法。若是同一種蛋白其線性規劃沒有其他盒子做的高,可檢驗改動條件下降其布景值然后下下降濃度來前進比值。
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