您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)! 登錄| 免費(fèi)注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:上海研謹(jǐn)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>免疫組化操作技巧
免疫組化ABC法
(一)、儀器設(shè)備
1)18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐;
2)水浴鍋
(二)、試劑
1)PBS緩沖液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。
2)0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液(CB,pH6.0,1000ml):檸檬酸三鈉 3g,檸檬酸 0.4g。
3)0.5mol/L EDTA緩沖液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10 mmol/L NaOH調(diào)至pH8.0,加水至1000ml。
4)1mol/L的TBS緩沖液(pH8.0):在800ml水中溶解121gTris堿,用1N的HCl調(diào)至pH8.0,加水至1000ml。
5)酶消化液: a、0.1%胰蛋白酶液:用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液:用0.1N的HCl配制。
6)3%甲醇-H2O2溶液:用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
7)封裱劑:
a、甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液(pH9.0~9.5)等量混合;
b、甘油和TBS(或PBS)配制。
8)TBS/PBS pH9.0~9.5,適用于熒光顯微鏡標(biāo)本;pH7.0~7.4適合于光學(xué)顯微鏡標(biāo)本。
(三)、
SABC法
1)脫蠟、水化。
2)PBS洗兩次各5分鐘。
3)用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2,室溫封閉5~10分鐘,蒸餾水洗3次。
4)抗原修復(fù)。
5)PBS洗5分鐘。
6)滴加正常山羊血清封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體。
7)滴加抗小鼠一抗(合適的濃度),室溫1小時(shí)或者4℃過夜或者37℃1小時(shí)
(4℃過夜后在37℃復(fù)溫45分鐘)。
8)PBS洗三次每次2分鐘。
9)滴加生物素化二抗,20℃~37℃20分鐘。
10)PBC洗3次每次2分鐘。
11)滴加試劑SABC,20℃~37℃20分鐘。
12)PBS洗4次每次5分鐘。
13)DAB顯色:DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色(鏡下掌握顯色程度)。
14)蒸餾水洗。蘇木素復(fù)染2分鐘、鹽酸酒精分化。
15)脫水、透明、封片、鏡檢。
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。