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還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒
測定試劑盒說明書

研究意義：
    GSH/GSSG 是細胞內重要的氧化還原對之一。因此，測定細胞內 GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態，也是谷胱甘肽氧化還原循環的主要指標之一。此外，總谷胱甘肽（total glutathione, tGSH）含量還能夠反映細胞 γ-谷氨酰循環狀態。通過該試劑盒，可以獲得四個指標，即 GSH 含量、GSSG 含量、總谷胱甘肽含量和 GSH/GSSG 比值。

測定原理：
    利用循環法測組織中總谷胱甘肽含量，2-VP 法測 GSSG 含量?？偣入赘孰暮?GSH+2GSSG，該指標與谷胱甘肽氧化還原循環無關，只與 γ-谷氨酰循環狀態，即 GSH 合
成和降解有關。

實驗中所需儀器及設備：
    可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1ml 比色皿、雙蒸水

試劑組成和配置：

試劑一×1 支；加雙蒸水 100ml，充分溶解，4℃保存，用于試劑二和試劑三溶解；
試劑二×1 支；加試劑一 11ml 充分溶解，4℃保存；
試劑三×1 支；臨用前，加試劑一 11ml 充分溶解；
試劑四×1 支，稀釋液四×1 支，臨用前，加 1ml 稀釋液四稀釋試劑四；
液體五×1 支；
試劑六×1 支，充分溶解于 50ml 雙蒸水；
GSH 標準品×1 支；臨用前，加雙蒸水定容 100ml，然后稀釋 10 倍，則為 10μmol/L；
GSSG 標準品×1 支；臨用前，加雙蒸水定容 100ml，然后稀釋 10 倍，則為 10μmol/L。
 

樣品前處理：
    稱取約 0.1g 樣品，加 1ml 試劑六，冰上充分研磨， 8000rpm 4℃離心 10min，取上清。 （如上清不清澈，再離心 3min）

總谷胱甘肽含量測定：
    1、將試劑一于 25℃預熱 30min
    2、按下表操作

  加試劑四后，迅速混勻，于 412nm處測定吸光值，記錄 30s 和 150s 的數據，分別記為 A1、A2、A3 和 A4。

GSSG 含量測定:
    1、將試劑一于 25℃預熱 30min
    2、按下表操作

加試劑五后混勻， 于37℃水浴30min后， 取0.1ml溶液進行下一步測定， 即下表中樣品0.1mL。

加試劑四后，迅速混勻，于 412nm 處測定吸光值，記錄 30s 和 150s 的數據，分別記為 B1、
B2、B3 和 B4。
tGSH 含量計算
tGSH（μmol/g）=（A4－A3）÷(A2－A1）×標準濃度（10μmol/L）×樣品測定前稀釋倍數
÷樣品質量（g） ，
GSSG（μmol/g）=（B4－B3）÷(B2－B1）×標準濃度（10μmol/L）×樣品測定前稀釋倍數
÷樣品質量（g） ，
GSH（μmol/g）=tGSH－2×GSSG。

注意事項：
    1、測定前請先用 1～2 個樣本做預實驗，如吸光值很高，則需用試劑六稀釋到適當倍數，使得測定過程吸光值呈線性變化
    2、配制試劑以及樣品處理都需在低溫下，可置于冰上
    3、因為提取過程中去掉蛋白質，所以提取液不能用于測定蛋白含量。如需測樣品的蛋白含
量，請事先將樣品分成兩份
    4、測定時也可將標準品配制成不同濃度后，制作成標準曲線，然后將測定樣品代入標準曲
線計算，標準品配制的濃度一般不超過 20μmol/L

還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒