檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒 三羧酸循環

產品名稱：檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒

產品英文名：  Citrate Synthase(CS)Assay Kit

產品貨號：BC1060                產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管/24樣      產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：2800
庫存狀態：現貨                          
關鍵字：檸檬酸合酶試劑盒|檸檬酸合酶活性檢測試劑盒| CS活性檢測|試劑盒

簡要介紹：
CS（EC 2.3.3.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中，是三羧酸循環個限速酶，是三羧酸循環主要調控位點之一。CS 催化乙酰CoA 和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶A，進一步水解產生檸檬酸；該反應促使無色的DTNB 轉變成黃色的TNB，在 412nm 處有特征吸光值。

產品詳細描述

商品貨號：	商品品牌：	規格	基本售價：	選擇規格
BC1060-10管/5樣	Solarbio	10管/5樣	900.00元
BC1060-25管/12樣	Solarbio	25管/12樣	1560.00元
BC1060-50管/24樣	Solarbio	50管/24樣	2800.00元

產品內容： 
提取液：液體 25mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑一：液體 5mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：液體 0.3mL×1 支，-20℃保存；
試劑三：液體 90mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×2 支，4℃保存，臨用前加入 2mL 雙蒸水，用不完的試劑仍 4℃保存；
試劑五：粉劑×4 支，-20℃保存，臨用前加入 500μL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑六：粉劑×2 支，-20℃保存，臨用前加入 1.5mL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存；

產品說明： 
CS（EC 2.3.3.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中，是三羧酸循環 個限速酶，是三羧酸循環主要調控位點之一。 CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶 A，進一步水解產生檸檬酸；該反應促使無色的 DTNB 轉變成黃色的 TNB，在 412nm 處有特征吸光值。
試驗中所需的儀器和試劑： 可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

操作步驟：

• 樣本前處理 組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1mL 提取液和 10μL 試劑二，用冰浴勻漿器或研 缽勻漿。
2 將勻漿液 600g，4℃離心 5min。
3 將上清液移另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
4 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的 CS。
5 在沉淀中加入 200μL 試劑一和 2μL 試劑二，反復吹打充分混勻，用于 CS 測定。
6 檸檬酸合酶酶活即沉淀和上清液中的酶活之和。
二、測定步驟：
1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長 412nm，蒸餾水調零。
2、試劑三置于 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動物）水浴中預熱 10min 左右（保證無沉淀）。
3、操作表： 在 1mL 玻璃比色皿中分別加入

將上述試劑按順序加入 1 mL 玻璃比色皿中，加試劑六的同時開始計時，記錄 412nm 波長下 10 秒時的初始吸光度 A1，之后迅速將比色皿連同反應液一起放入 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物 種）水浴中準確反應 2 分鐘；迅速取出比色皿并擦干，412 nm 下記錄 2 分 10 秒時的吸光度 A2，上 清液、沉淀的測定管、對照管均需測量(每個樣本需測 4 管)。 計算上清液的測定管ΔA1=A2-A1，上清液對照管的ΔA1’=A2-A1，沉淀的測定管ΔA2=A2-A1， 沉淀的對照管ΔA2’=A2-A1，計算ΔA 上清=ΔA1-ΔA1’，計算ΔA 沉淀=ΔA2-ΔA2’。

注意事項： 
1、測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置，以免變性和失活。
2、比色皿中反應液的溫度必須保持 37℃或 25℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃或 25℃蒸餾 水，將此燒杯放入 37℃或 25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
3、兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。
三、CS 活性計算： 
1、組織中 CS 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：37℃或 25℃下每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1 nmol TNB 定義 為一個酶活力單位。
CS 上清（U/mg prot）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反總÷（Cpr 上清×V 樣本）÷T=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清 CS 沉淀（U/mg prot）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反總÷（Cpr 沉淀×V 樣本）÷T =1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀 CS（U/mg prot）=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清+1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀。
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：37℃或 25℃下每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產生 1 nmol TNB 定義為一 個酶活力單位。 CS 上清（U/g 鮮重）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反總÷（W×V 樣本÷V 提取）÷T =1050×ΔA 上清÷W  CS 沉淀（U/g 鮮重）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反總÷（W×V 樣本÷V 沉淀）÷T =212×ΔA 沉淀÷W CS（U/g 鮮重）=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷W+212×ΔA 上清÷W。
2、細菌或培養細胞中 CS 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：37℃或 25℃下每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1 nmol TNB 定義為一 個酶活力單位。 CS 上清（U/mg prot）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反總÷（Cpr 上清×V 樣本）÷T=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清 CS 沉淀（U/mg prot）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反總÷（Cpr 沉淀×V 樣本）÷T=1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀 CS（U/mg prot）=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清+1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀。
（2）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：37℃或 25℃下每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘催化產生 1 nmol 5TNB 定 義為一個酶活力單位。 CS 上清（U/10 4 cell）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反總÷（500×V 樣本÷V 提取）÷T=2.1×ΔA 上清 CS 沉淀（U/10 4 cell）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反總÷（500×V 樣本÷V 沉淀）÷T =0.4242×ΔA 沉淀 CS（U/10 4 cell）=CS 上清+CS 沉淀=2.1×ΔA 上清+0.4242×ΔA 沉淀。
 ε：TNB 的消光系數，13.6×10 -3mL/(nmol·cm)；V 反總：反應體系總體積，1mL；d：比色 皿光徑，1cm；V 樣本：加入的樣本體積，0.035mL；V 提取：提取液體積，1mL；V 沉淀：溶 解沉淀的總體積，0.202mL；T：反應時間，2min；Cpr 上清：上清液的蛋白濃度，mg/mL；Cpr 沉淀：沉淀溶解后的蛋白濃度, mg/mL；W：樣本鮮重，g。
?檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒 三羧酸循環
相關文獻：
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