α-淀粉酶活性檢測試劑盒 微量法

產品名稱:α-淀粉酶活性檢測試劑盒 微量法

產品英文名: Micro α-amylase Assay Kit

產品貨號：BC0615          產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：100管/48樣      產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：860
庫存狀態：現貨                          
關鍵字: α-淀粉酶檢測試劑盒|淀粉酶檢測試劑盒|α-淀粉酶|試劑盒

簡要介紹：
淀粉酶負責水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時使淀粉的粘度降低，因此又稱為液化酶。
    還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質。β-淀粉酶不耐熱，在70℃鈍化15min，從而測定α-淀粉酶活性。

產品詳細描述
產品內容：
試劑一：液體20mL×1瓶，室溫保存。若有黃色晶體析出，可適當加熱溶解后再用。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入10mL蒸餾水，置于常溫水中并加熱煮沸，期間不斷攪拌粉劑溶解。
標準品：粉劑×1支，10mg無水葡萄糖。
產品說明：
淀粉酶負責水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時使淀粉的粘度降低，因此又稱為液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成還原糖，還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質，在540 nm有吸收峰；通過測定540 nm吸光度增加速率，計算淀粉酶活性。α-AL耐熱，但是β-淀粉酶可在70℃鈍化15min。因此粗酶液經過70℃鈍化15min，就只有α-AL能夠催化淀粉水解。
需自備的儀器和用品：
酶標儀或分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、96孔板/微量比色皿、研缽和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
稱取約0.1g樣本，加0.8mL蒸餾水勻漿；勻漿后在室溫下放置提取15min，每隔5min振蕩1次，使其充分提取；6000g，常溫離心10min，吸取上清液并加蒸餾水定容10 mL，搖勻，即為淀粉酶原液。
二、測定步驟和加樣表：

1. 分光光度計或者酶標儀預熱30min以上，調節波長540nm。
2. 將葡萄糖用蒸餾水稀釋為0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078和0.0039 mg/mL的標準溶液。
3. 按操作表依次加入各試劑：

混勻，90℃水浴10min，蒸餾水調零，540nm處讀取對照管、測定管、標準管、空白管吸光度，分別記為A對照、A測定、A標準和A空白，計算ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標準=A標準-A空白。
三、α-淀粉酶活性計算：

1. 標準曲線的繪制

以ΔA標準為y軸，以標準溶液濃度為x軸，繪制標準曲線，得到方程y=kx+b。將
ΔA測定帶入方程得到x（mg/mL）。
2、α淀粉酶活性的計算
（1）按照樣本質量計算
單位定義：每g 組織每分鐘催化產生1mg 還原糖定義為1 個酶活力單位。
α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鮮重)=x×V 樣÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=2×x÷W
（2）按照蛋白質含量計算
單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產生1mg 還原糖定義為1 個酶活性單位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= x×V 樣÷（V 樣×Cpr）÷T==0.2×x÷Cpr
（3）血清（漿）樣本中α-淀粉酶活性計算
單位定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產生1mg 還原糖定義為1 個酶活性單位。
α-淀粉酶活性(mg/ml)= x÷T=0.2×x
V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.25 mL；V 樣總：提取液總體積，10 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，5min。
注意事項：
當測定的吸光值大于1時，可以對樣本進行適當稀釋后測定。