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全蛋白提取試劑盒(強)用于哺乳動物組織和細胞中提取總蛋白,試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,作用較為強烈,可快速獲得總蛋白,可用于免疫印跡實驗等基礎研究實驗,由于含有上述的酶抑制劑,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。
產品組成:
| 規格 | 儲存條件 |
裂解液(強) | 100 ml | 2-8 oC |
磷酸酶抑制劑(100x) | 1ml | -20 oC |
蛋白酶抑制劑(100x) | 1 ml | |
PMSF(100x) | 1ml |
操作方法:
1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF;混勻,放置在冰上備用;稱取0.1g的新鮮組織,放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處,用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液,研磨直沒有明顯的組織塊,這個過程注意冰上操作;將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中,4 oC 12000g離心30min;
吸取上清新的管中;
進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
(提取好的蛋白建議保存于-80 oC,即用即取,避免反復凍融,避免長時間儲存。)
2、細胞總蛋白的提取
裂解液的用量:107個細胞需要裂解液1ml;
貼壁細胞:棄去培養基,用冷的PBS洗兩次,棄去PBS,然后加入計算好的細胞裂解液;在冰上用細胞刮刀進行刮離細胞,
將刮離的細胞裂解液移入EP管中,顛倒裂解20-30min
懸浮細胞:4 oC 400g離心收集細胞,用冷的PBS洗兩次細胞,同樣按細胞數加入裂解液,
渦旋10s,放置冰上裂解10min,重復3-4次;
裂解完畢之后,將細胞裂解液4 oC 12000g離心30min;
將上清移入新的EP管中;
進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
(提取好的蛋白建議保存于-80 oC,即用即取,避免反復凍融,避免長時間儲存。)
注意事項:
實驗過程,所有試劑都要需要預冷或者即融,保證操作過程中的低溫環境;
PSMF(有毒)現用現加,因為PMSF在水溶液中會快速降解;