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3-磷酸甘油酸激酶（PGK）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2250
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存4周，禁止反復凍融

2. 試劑三：臨用前加入2.5 mL 蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存4周，禁止反復凍融；

3. 試劑四：臨用前加入3 mL 蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存4周，禁止反復凍融；

4. 試劑五：提供一空棕色試劑瓶。臨用前取一支試劑五倒入空瓶中并加入10 mL 蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存2周，禁止反復凍融（該試劑為凍干試劑，可能存在肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現象，此現象不影響使用，實際質量相同）；

5. 工作液的配制：按照蒸餾水：試劑一：試劑二：試劑三：試劑四：試劑五=1.14mL：1.5mL：0.06 mL：0.15 mL：0.15 mL：0.6 mL（共3.6mL，4T）的比例配制，根據樣本量配制，現用現配。

產品說明：
3-磷酸甘油酸激酶（Phosphoglycerate Kinase，PGK，EC.2.7.2.3）是糖酵解的關鍵酶，也是生物得以生存的關鍵酶。廣泛存在于動植物和微生物體內，具有影響DNA復制和修補及刺激病毒RNA合成等生物學功能，廣泛應用于藥物靶標設計。

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，引起340nm處的吸光度下降，即反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

1. ΔA大于0.8或者A1測定小于0.9時，建議將粗酶液用提取液稀釋后再進行測定。當ΔA小于0.01時，可以延長反應時間（10min或15min）或增加樣本體積來測定。

2. 空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.01。

3. 樣本的蛋白濃度需自行測定，由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以測定樣本蛋白濃度時需扣除提取液自身蛋白濃度。

實驗實例：

1. 取0.1g白菜加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后再用提取液稀釋4倍，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=1.126-0.654=0.472，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.916-0.914=0.002，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.472-0.002=0.47，按樣本質量計算酶活得：PGK（U/g 質量）=321.54×ΔA÷W×稀釋倍數= 321.54×0.47÷0.1×4=6044.952 U/g 質量。

2. 取0.1g小鼠肌肉加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后再用提取液稀釋20倍，之后按照測定步驟操作，測得計算，ΔA測定管=A1測定-A2測定= 0.908-0.35=0.558，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.916-0.914=0.002，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.558-0.002=0.556，按樣本質量計算酶活得：PGK（U/g 質量）=321.54×ΔA÷W×稀釋倍數= 321.54×0.556÷0.1×20=35755. 248 U/g 質量。

3. 取駱駝血清樣本100uL按照測定步驟直接測定，測得計算，ΔA測定管=A1測定-A2測定= 0.966-0.907=0.059，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.916-0.914=0.002，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.059-0.002=0.057，按液體體積計算酶活得：PGK（U/mL）=321.54×ΔA=321.54×0.057=18.328 U/mL。

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