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組織銅（Cu）含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號(hào)：BC5560

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：若有試劑析出，置于37℃水浴溶解即可。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mmol/L（即10000µmol/L）硫酸銅標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

銅（Cu）是人體必需的微量元素之一，也是蛋白質(zhì)以及酶的重要組成部分。可以存在于紅細(xì)胞的內(nèi)外，主要功能是輔助造血，即催化血紅蛋白的合成。銅元素可以適當(dāng)促進(jìn)人體的骨骼發(fā)育，促進(jìn)人體神經(jīng)系統(tǒng)以及腦部發(fā)育，維持嬰幼兒的正常生長發(fā)育，因此，測定組織內(nèi)銅離子含量可知體內(nèi)是否缺銅。

酸性條件下，Cu²⁺從銅藍(lán)蛋白和清蛋白中解離出來，與絡(luò)合劑3,5-二溴-PAESA反應(yīng)，產(chǎn)生紫色絡(luò)合物，在580nm處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)吸光度與濃度成正比，從而計(jì)算出Cu²⁺濃度。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清待測。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至580nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 80µmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：取100µL 10mmol/L的標(biāo)準(zhǔn)液加入400μL 蒸餾水混勻，即2000µmol/L的標(biāo)準(zhǔn)品；再取40μL 2000µmol/L的標(biāo)準(zhǔn)品和960μL 蒸餾水混合，即配成80µmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3、 實(shí)驗(yàn)前根據(jù)樣本量取部分試劑一37℃預(yù)熱10min。

4、 操作表：（在1.5mLEP管中依次加入以下試劑）

三、組織銅含量的計(jì)算

1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

銅含量（μmol/g）=ΔA測定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷W =0.08×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

2. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

銅含量（μmol/g prot）=ΔA測定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷（Cpr×V提取）=80×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，80µmol/L；V提?。?/span>前處理中蒸餾水體積，0.001L；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。

注意事項(xiàng)：

1. 37℃孵育5min后請(qǐng)立即測定吸光度，若樣本數(shù)量過多，可分批次測定，盡量確保在20min內(nèi)完成測定。

2. 如果樣本測定吸光值大于0.5，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測定，注意同步修改計(jì)算公式。

3. 如果樣本測定吸光值小于0.005或接近空白管吸光值，可適當(dāng)增大樣本量，空白管和標(biāo)準(zhǔn)管也需要進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 稱取0.1g鼠肺加入1mL蒸餾水進(jìn)行勻漿研磨，離心取上清后按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得計(jì)算ΔA測定=A測定-A空白=0.126-0.071=0.055，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.384-0.071=0.313，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：

組織銅含量（μmol/g）=0.08×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =0.141μmol/g。

2. 稱取0.1010g杏仁加入1mL蒸餾水進(jìn)行勻漿研磨，離心取上清后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計(jì)算ΔA測定=A測定-A空白=0.267-0.071=0.196，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.384-0.071=0.313，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：

組織銅含量（μmol/g）= 0.08×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =0.496μmol/g。

3. 稱取0.1053g黃豆粉加入1mL蒸餾水進(jìn)行勻漿研磨，離心取上清后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計(jì)算ΔA測定=A測定-A空白=0.342-0.071=0.271，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.384-0.071=0.313，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：

組織銅含量（μmol/g）=0.08×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =0.658μmol/g。

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