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尿液中的合成代謝類固醇類藥物固相萃取凈化方法
閱讀：3155 發布時間：2010-5-25
尿液中的合成代謝類固醇類藥物固相萃取凈化方法
1．樣品預處理
在尿液中加入內標物和2mLβ-葡萄糖醛酸酶（ 5000F單位/mL）充分混合，在65℃條件下水解3h，處理前冷卻，用1.0mol/L的KOH溶液調節pH值至6.0±0.5；
2. SPE凈化
a. 活化：分別用3mL甲醇，3mL去離子水和1mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液（pH6.0）；在上樣前保持柱床濕潤；
b. 上樣：以1~2 mL/min的流速將樣品載入SPE柱；
c. 淋洗：用3mL10%（v/v）甲醇去離子水溶液淋洗，通空氣5min干燥柱床；再用1mL的正己烷或者正己烷/乙酸乙酯（ 50/ 500，v/v）淋洗SPE柱；
d. 洗脫：可以選擇如下四種方法，收集洗脫液；
1） 3mL二氯甲烷/異丙醇/NH4OH（ 78/ 80/ 2, v/v），溶劑流速控制1~ 2mL/min，收集洗脫液；洗脫液必須為當天制備的新鮮溶液;
2）3mL二氯甲烷/異丙醇（80/20）;
3）3mL乙酸乙酯;
4）3mL甲醇。
3．蒸發干燥
4．衍生化
加入50μL MSTFA（含有3%的碘化*基甲硅烷基），充分混合，70℃條件下反應 20min，冷卻。
5. Varian Saturn 2200 GC-MS檢測
6. 樣品成分
睪丸激素
19-noretiocholanon
16-A-hydroxyetiocholanone
康復龍
普拉睪酮
10-去甲睪酮
康復龍代謝物1
康復龍代謝物2
11-B-羥基睪丸激素
去氫甲基睪丸素
19-norandosterone
16-A-表睪（甾）酮
司坦唑醇
1．樣品預處理
在尿液中加入內標物和2mLβ-葡萄糖醛酸酶（ 5000F單位/mL）充分混合，在65℃條件下水解3h，處理前冷卻，用1.0mol/L的KOH溶液調節pH值至6.0±0.5；
2. SPE凈化
a. 活化：分別用3mL甲醇，3mL去離子水和1mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液（pH6.0）；在上樣前保持柱床濕潤；
b. 上樣：以1~2 mL/min的流速將樣品載入SPE柱；
c. 淋洗：用3mL10%（v/v）甲醇去離子水溶液淋洗，通空氣5min干燥柱床；再用1mL的正己烷或者正己烷/乙酸乙酯（ 50/ 500，v/v）淋洗SPE柱；
d. 洗脫：可以選擇如下四種方法，收集洗脫液；
1） 3mL二氯甲烷/異丙醇/NH4OH（ 78/ 80/ 2, v/v），溶劑流速控制1~ 2mL/min，收集洗脫液；洗脫液必須為當天制備的新鮮溶液;
2）3mL二氯甲烷/異丙醇（80/20）;
3）3mL乙酸乙酯;
4）3mL甲醇。
3．蒸發干燥
4．衍生化
加入50μL MSTFA（含有3%的碘化*基甲硅烷基），充分混合，70℃條件下反應 20min，冷卻。
5. Varian Saturn 2200 GC-MS檢測
6. 樣品成分
睪丸激素
19-noretiocholanon
16-A-hydroxyetiocholanone
康復龍
普拉睪酮
10-去甲睪酮
康復龍代謝物1
康復龍代謝物2
11-B-羥基睪丸激素
去氫甲基睪丸素
19-norandosterone
16-A-表睪（甾）酮
司坦唑醇
方法中使用的SPE柱：
Bond Elut Certify（130mg, 3mL,PN.12102051）。
Bond Elut Certify（130mg, 3mL,PN.12102051）。
北京東方惠普科技有限公司
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：徐兢苑