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分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器使用方法與保養(yǎng)
閱讀：4857 發(fā)布時(shí)間：2009-9-10分子生物學(xué)操作中會(huì)涉及一系列儀器，使用不當(dāng)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗、減少儀器使用壽命或損壞儀器。因此在進(jìn)行操作前細(xì)致地了解各種儀器的使用方法及注意事項(xiàng)，是使后繼實(shí)驗(yàn)事半功倍的一個(gè)必要準(zhǔn)備。
一、冷凍離心機(jī)
低溫分離技術(shù)是分子生物學(xué)研究中*的手段。基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實(shí)驗(yàn)中，都離不開(kāi)低溫離心技術(shù)，因此低溫冷凍離心機(jī)已成為分子生物學(xué)研究中必需的重要工具。
使用方法：
1.離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平臺(tái)上，并力求使機(jī)器處于水平位置以免離心時(shí)造成機(jī)器震動(dòng)。
2.打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，按要求裝上所需的轉(zhuǎn)頭，將預(yù)先以托盤天平平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上（離心筒須與樣品同時(shí)平衡），關(guān)閉機(jī)蓋。
3.按功能選擇鍵，設(shè)置各項(xiàng)要求：溫度、速度、時(shí)間、加速度及減速度，帶電腦控制的機(jī)器還需按儲(chǔ)存鍵，以便記憶輸入的各項(xiàng)信息。
4.按啟動(dòng)鍵，離心機(jī)將執(zhí)行上述參數(shù)進(jìn)行運(yùn)作，到預(yù)定時(shí)間自動(dòng)關(guān)機(jī)。
5.待離心機(jī)*停止轉(zhuǎn)動(dòng)后打開(kāi)機(jī)蓋，取出離心樣品，用柔軟干凈的布擦凈轉(zhuǎn)頭和機(jī)腔內(nèi)壁，待離心機(jī)腔內(nèi)溫度與室溫平衡后方可蓋上機(jī)蓋。
注意事項(xiàng)：
1.機(jī)體應(yīng)始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良好的接地線。
2.開(kāi)機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭安裝是否牢固，機(jī)腔有無(wú)異物掉入。
3.樣品應(yīng)預(yù)先平衡，使用離心筒離心時(shí)離心筒與樣品應(yīng)同時(shí)平衡。
4.揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí)，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏，以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。
5.擦拭離心機(jī)腔時(shí)動(dòng)作要輕，以免損壞機(jī)腔內(nèi)溫度感應(yīng)器。
6.每次操作完畢應(yīng)作好使用情況記錄，并定期對(duì)機(jī)器各項(xiàng)性能進(jìn)行檢修。
7.離心過(guò)程中若發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，應(yīng)立即關(guān)閉電源，報(bào)請(qǐng)有關(guān)技術(shù)人員檢修。
附：相對(duì)離心力與每分鐘轉(zhuǎn)速的換算
離心機(jī)的轉(zhuǎn)速，在以前實(shí)驗(yàn)資料中一般以每分鐘多少轉(zhuǎn)來(lái)表示。由于離心力不僅為轉(zhuǎn)速函數(shù)，亦為離心半徑的函數(shù)，即轉(zhuǎn)速相同時(shí)，離心半徑越長(zhǎng)，產(chǎn)生的離心力越大。因此僅以轉(zhuǎn)速表達(dá)離心力是不夠科學(xué)的，近年來(lái)主張用相對(duì)離心力（RCF）來(lái)表示比較合理。現(xiàn)在資料中，已改用相對(duì)離心力來(lái)表示。
二、PCR擴(kuò)增儀
目前各公司提供的PCR儀操作方法各有不同，按其操作說(shuō)明進(jìn)行操作。
值得提出的是，在使用一定時(shí)期后，樣品孔的實(shí)際溫度與儀器顯示溫度有時(shí)會(huì)有較大差異，應(yīng)當(dāng)請(qǐng)廠商的人員校對(duì)儀器的各項(xiàng)性能。
三、數(shù)字式酸度計(jì)
【一】、準(zhǔn)備工作
1.儀器應(yīng)平放在符合使用環(huán)境的工作臺(tái)上，依視覺(jué)角度支起支架。
2.pH值的定位測(cè)量法：
（一）二點(diǎn)定位法（高精度測(cè)量方法）
（1） 連接好電極線路，將參比電極及活化滿24h以上清潔的PH電極移入*標(biāo)準(zhǔn)緩沖液pH1中（例pH1=4.00），待儀器響應(yīng)穩(wěn)定后，調(diào)節(jié)定位旋鈕至儀器顯示為“0.00”；
（2） 將電級(jí)系統(tǒng)從第1種標(biāo)準(zhǔn)液中取出，用去離子水沖洗干凈后以濾紙吸干電級(jí)表面水份，移入第2種標(biāo)準(zhǔn)液（例pH2=9.18）中，儀器響應(yīng)穩(wěn)定后，調(diào)節(jié)斜率旋鈕，使儀器顯示為（△pH=pH1-pH2=9.18-4.00=5.18）此后斜率旋鈕不可再動(dòng)，除非更換電極系統(tǒng)；
（3） 斜率調(diào)節(jié)完成后，重新調(diào)節(jié)定位旋鈕，使儀器顯示第2種標(biāo)準(zhǔn)液的實(shí)際pH值（9.18），至此2點(diǎn)定位結(jié)束；
（4） 將電極從第2種標(biāo)準(zhǔn)液中取出沖洗、吸干后移入待測(cè)溶液中，儀器響應(yīng)穩(wěn)定后顯示的數(shù)值即為待測(cè)溶液的pH值。
（二）一點(diǎn)定位法（粗略測(cè)量法）
（1） 將溫度補(bǔ)償旋鈕調(diào)至溶液溫度值；
（2） 向左將斜率補(bǔ)償旋鈕旋轉(zhuǎn)至頭；
（3） 將電級(jí)系統(tǒng)移入標(biāo)準(zhǔn)液中（一點(diǎn)法僅用一種標(biāo)準(zhǔn)液，如pH=4.00時(shí)），調(diào)節(jié)定位旋鈕使儀器顯示“4.00”；
（4） 取出電級(jí)沖洗吸干水分后移至待測(cè)溶液中，儀器響應(yīng)穩(wěn)定后顯示的數(shù)值即為待測(cè)溶液的pH值。
（三）溫度的測(cè)量
1.將功能選擇撥至溫度檔。
2.將溫度探頭插入插孔，并將溫度探頭置于環(huán)境條件或溶液中，儀器響應(yīng)穩(wěn)定后儀器顯示值即為環(huán)境條件或溶液溫度值。
（四）注意事項(xiàng)
1.認(rèn)真做好儀器使用前準(zhǔn)備工作。
2.儀器通電后或測(cè)量過(guò)程中出現(xiàn)顯示不穩(wěn)或亂跳現(xiàn)象，應(yīng)切斷電源進(jìn)行檢查，如電壓、預(yù)熱時(shí)間及電極系統(tǒng)等是否正常。
3.使用不同電極應(yīng)注意排除離子的干擾，選擇好鹽橋，必要時(shí)應(yīng)使用離子強(qiáng)度固定劑。
4.電極系統(tǒng)從第1種溶液取出移入第2種溶液之前，須用去離子水或雙蒸水清洗干凈，再用濾紙吸干表面水分，以免影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
5.儀器應(yīng)存放于干燥、清潔無(wú)腐蝕的場(chǎng)所，每次測(cè)量結(jié)束后應(yīng)關(guān)閉電源，退出電極及溫度探頭妥善保存。玻璃電極清洗后可浸于去離子水待用（注意水面不得低于玻璃球泡），甘汞電極清潔后套上橡皮帽置于配套盒中保存，當(dāng)甘汞電極內(nèi)充液泄漏或不飽和及鹽橋中斷時(shí)，應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充飽和內(nèi)充液。
6.該類儀器均采用大規(guī)模集成電路，輸入阻值較高，在對(duì)儀器內(nèi)部進(jìn)行任何零部件修理焊接時(shí)，應(yīng)使用45W以下有良好地線的烙鐵，無(wú)接地線烙鐵應(yīng)撥下電源插頭焊接。
【二】、pH（酸堿度）測(cè)量
1.將功能選擇撥至“pH”檔，調(diào)節(jié)定位旋扭，斜率補(bǔ)償旋鈕及溫度補(bǔ)償旋鈕顯示值應(yīng)有相應(yīng)變化。
2.通過(guò)儀器溫度檔測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)液及待測(cè)樣品液溫度（要求兩種液體溫度保持一致，以減少測(cè)定誤差），并用溫度補(bǔ)償旋鈕調(diào)節(jié)至溶液實(shí)際溫度值。
四、分光光度計(jì)
不同物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)入射光的吸收程度各不相同，從而形成特征性的吸收光譜。分光光度法不僅適應(yīng)于可見(jiàn)光區(qū)，同時(shí)還可擴(kuò)展至紫外光區(qū)及紅外光區(qū)，因此給科研實(shí)驗(yàn)帶來(lái)了極大方便。下面重點(diǎn)介紹分光光度計(jì)的使用及注意事項(xiàng)。
使用規(guī)則：
1.接通穩(wěn)壓器電源，待穩(wěn)壓器輸出電壓穩(wěn)定至200V后打開(kāi)光度計(jì)電源，儀器自動(dòng)進(jìn)入初始化。
2.初始化約需時(shí)10 min，內(nèi)容包括：①尋找零級(jí)光；②建立基線；③zui后當(dāng)顯示器指示××nm時(shí)，，表明儀器完成初始化程序，可進(jìn)入檢測(cè)狀態(tài)。
3.按要求輸入各項(xiàng)參數(shù)，選擇相應(yīng)比色杯（玻璃或石英），將空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及待測(cè)管依次放入比色皿架內(nèi)，關(guān)上比色池蓋。
4.以空白管自動(dòng)調(diào)零。
5.試樣槽依次移至樣品位置，待數(shù)據(jù)顯示穩(wěn)定后按“START/STOP”鍵，打印機(jī)自動(dòng)打印所測(cè)數(shù)據(jù)，重復(fù)上述步驟，直到所有樣品檢測(cè)完畢。
6.檢測(cè)結(jié)束后應(yīng)及時(shí)取出比色杯，并清洗干凈放回原處，同時(shí)關(guān)上儀器電源開(kāi)關(guān)及穩(wěn)壓器電源開(kāi)關(guān)，做好使用情況登記。
注意事項(xiàng)：
1.儀器初次使用或使用較長(zhǎng)時(shí)間（一般為一年），需檢查波長(zhǎng)準(zhǔn)確度，以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。
2.由于長(zhǎng)途運(yùn)輸或室內(nèi)搬運(yùn)可能造成光源位置偏移，導(dǎo)致亮電流漂移增大。此時(shí)對(duì)光源位置進(jìn)行調(diào)整，直至達(dá)到有關(guān)技術(shù)指標(biāo)為止。若經(jīng)調(diào)整校正后波長(zhǎng)準(zhǔn)確度、暗電源漂移及亮電流漂移三項(xiàng)關(guān)鍵指標(biāo)仍未符合要求，則應(yīng)停止使用，并及時(shí)通知有關(guān)技術(shù)人員檢修。
3.每次檢測(cè)結(jié)束后應(yīng)檢查比色池內(nèi)有否溶液溢出，若有溢出應(yīng)隨時(shí)用濾紙吸干，以免引起測(cè)量誤差或影響儀器使用壽命。
4.儀器每次使用完畢，應(yīng)于燈室內(nèi)放置數(shù)袋硅膠（或其它干燥劑），以免反射鏡受潮霉變或沾污，影響儀器使用，同時(shí)蓋好防塵罩。
5.儀器室應(yīng)通常保持潔凈干燥，室溫以5-35℃為宜，相對(duì)溫度不得超過(guò)85%。有條件者應(yīng)于室內(nèi)配備空調(diào)機(jī)及除濕機(jī)，以確保儀器性能穩(wěn)定。
6.儀器室不得存放酸、堿、揮發(fā)性或腐蝕性等物質(zhì)，以免損壞儀器。
7.儀器長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)，應(yīng)定時(shí)通電預(yù)熱，每周1次，每次30min，以保證儀器處于良好使用狀態(tài)。
五、電泳儀
電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究*的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中zui常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳，是指帶電粒子在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)，不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同，因此在電場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)速度不同，根據(jù)這一特征，應(yīng)用電泳法便可以對(duì)不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M(jìn)行組份分析或單個(gè)組份提取制備，這在臨床檢驗(yàn)或?qū)嶒?yàn)研究中具有極其重要的意義。電泳儀正是基于上述原理設(shè)計(jì)制造的。下面簡(jiǎn)單介紹其使用方法及注意事項(xiàng)。
使用方法：
1.首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。
2.電泳儀電源開(kāi)關(guān)調(diào)至關(guān)的位置，電壓旋鈕轉(zhuǎn)到zui小，根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。
3.接通電源，緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)鈕直到達(dá)到的所需電壓為止，設(shè)定電泳終止時(shí)間，此時(shí)電泳即開(kāi)始進(jìn)行。
4.工作完畢后，應(yīng)將各旋鈕、開(kāi)關(guān)旋至零位或關(guān)閉狀態(tài)，并撥出電泳插頭。
注意事項(xiàng)：
1.電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時(shí)要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。
2.儀器通電后，不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險(xiǎn)絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。
3.由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳時(shí)所通過(guò)的電流量也不同，其泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。
4.在總電流不超過(guò)儀器額定電流時(shí)（zui大電流范圍），可以多槽關(guān)聯(lián)使用，但要注意不能超載，否則容易影響儀器壽命。
5.某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時(shí)，允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開(kāi)機(jī)，但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負(fù)載再開(kāi)機(jī)，否則電壓表指針將大幅度跳動(dòng)，容易造成不必要的人為機(jī)器損壞。
6.使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進(jìn)行檢修，以免發(fā)生意外事故。
六、分析天平
分析天平是定量分析工作中*的重要儀器，充分了解儀器性能及熟練掌握其使用方法，是獲得可靠分析結(jié)果的保證。分析天平的種類很多，有普通分析天平、半自動(dòng)/全自動(dòng)加碼電光投影阻尼分析天平及電子分析天平等。下面就電子分析天平的使用方法及注意事項(xiàng)做一介紹。
操作方法：
1.檢查并調(diào)整天平至水平位置。
2.事先檢查電源電壓是否匹配（必要時(shí)配置穩(wěn)壓器），按儀器要求通電預(yù)熱至所需時(shí)間。
3.預(yù)熱足夠時(shí)間后打開(kāi)天平開(kāi)關(guān)，天平則自動(dòng)進(jìn)行靈敏度及零點(diǎn)調(diào)節(jié)。待穩(wěn)定標(biāo)志顯示后，可進(jìn)行正式稱量。
4.稱量時(shí)將潔凈稱量瓶或稱量紙置于稱盤上，關(guān)上側(cè)門，輕按一下去皮鍵，天平將自動(dòng)校對(duì)零點(diǎn)，然后逐漸加入待稱物質(zhì)，直到所需重量為止。
5.被稱物質(zhì)的重量是顯示屏左下角出現(xiàn)“→”標(biāo)志時(shí)，顯示屏所顯示的實(shí)際數(shù)值。
6.稱量結(jié)束應(yīng)及時(shí)除去稱量瓶（紙），關(guān)上側(cè)門，切斷電源，并做好使用情況登記。
注意事項(xiàng)：
1.天平應(yīng)放置在牢固平穩(wěn)水泥臺(tái)或木臺(tái)上，室內(nèi)要求清潔、干燥及較恒定的溫度，同時(shí)應(yīng)避免光線直接照射到天平上。
2.稱量時(shí)應(yīng)從側(cè)門取放物質(zhì)，讀數(shù)時(shí)應(yīng)關(guān)閉箱門以免空氣流動(dòng)引起天平擺動(dòng)。前門僅在檢修或清除殘留物質(zhì)時(shí)使用。
3.電子分析天平若長(zhǎng)時(shí)間不使用，則應(yīng)定時(shí)通電預(yù)熱，每周一次，每次預(yù)熱2h，以確保儀器始終處于良好使用狀態(tài)。
4.天平箱內(nèi)應(yīng)放置吸潮劑（如硅膠），當(dāng)吸潮劑吸水變色，應(yīng)立即高溫烘烤更換，以確保吸濕性能。
5.揮發(fā)性、腐蝕性、強(qiáng)酸強(qiáng)堿類物質(zhì)應(yīng)盛于帶蓋稱量瓶?jī)?nèi)稱量，防止腐蝕天平。
6.通電前應(yīng)按工作電源要求檢查電壓是否符合要求，若電源波動(dòng)太大，應(yīng)經(jīng)交流穩(wěn)壓后再送接儀器。
7.電源應(yīng)用良好接線，以消除外界干擾，使用攪拌器時(shí)，務(wù)必使攪拌器外殼與儀器接地端相連。
8.接通儀器電源，經(jīng)10min預(yù)熱后，可進(jìn)行測(cè)量工作。