抗眼肌抗體EMAb的檢測方法

    抗眼肌抗體（eyemuscleantilody，EMAb）為一類能與眼肌細(xì)胞膜及可溶性抗原結(jié)合的自身抗體。楊清萍等（1998）在提取牛眼肌膜抗原的基礎(chǔ)上，建立了檢測EMAb的免疫印跡（WB）法，對(duì)自身免疫性甲狀腺疾病及SLE患者進(jìn)行了檢測。現(xiàn)介紹WB法檢測EMAB。

    1．操作步驟  將所提取的眼肌膜抗原多肽轉(zhuǎn)印于硝酸纖維膜（NC膜，孔徑0．3um）上，將NC膜置5％脫脂奶粉溶液內(nèi)封閉過夜；含0．3％Tween 20，pH7．4的PBS洗滌；干后切條，4~C保存?zhèn)溆谩Ｗ?/span>WB法時(shí)，將抗原膜條置反應(yīng)槽中，加0．1mL兔血清，含0．3％Tween 20，pH7．4的0．01moL／LPBS 0．9mL和待測血清20~zL，37~C孵育45min，洗滌，每槽加辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗人IgC lmL，37~C孵育45min，洗滌，加DAB底物液lmL，37~C20rain，加2mol／LH2S040．5mL終止反應(yīng)2min后，流水沖洗，讀取結(jié)果。

    2．臨床意義  有突眼征和無突眼征的Graves病患者血清中EMAb檢出率較高，但抗體陽性亦見于部分無甲狀腺功能異常的突眼征患者，橋本甲狀腺炎，SLE等患者中。SLE患者血清中存在的EMAb與自身免疫性甲狀腺疾病患者的EMAb有所不同，主要針對(duì)42kD和35kD多肽，這種異質(zhì)性抗體與抗核抗體無關(guān)，不能被ENA吸收，其存在意義尚不清楚，可能是SLE患者自身免疫反應(yīng)的一種表現(xiàn)。

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