類固醇激素標志物酶聯免疫測定的標準化

    類固醇激素測定中的問題主要是密切相關的交叉反應物及血漿中結合蛋白的存在，尿液測定則新陳代謝產物是主要問題。zui初，大多數類固醇激素是用以’H作標記物及用有機溶劑提取類固醇的放免方法測定，通常采用層析方法去除可能存在的交叉反應類固醇。

    為校正預處理中的損失，提取前在樣本中加入微量‘H標記的類固醇以估計提取回收率。這種方法通常非常準確，但由于操作步驟較多，精密度易受影響。目前，由于更為特異的抗血清和從結合蛋白中釋放類固醇激素的封閉物質的發展，大多數類固醇激素測定方法已改為直接測定。

    雖然這些方法減少了干擾，但并沒有*排除，因此，結合蛋白仍與分析物及競爭性標記物相互作用。為解決這些問題，可將純的類固醇加入至已經炭吸附去除內源性類固醇的血清基質中制備標準晶，炭吸附處理也會去除可能會產生交叉反應或非特異干擾測定的小分子物質，因此，這樣制備的標準品與臨床樣本并不一致，實際上，這意味著標準品的定值與類固醇的實際含量不一致。

    在自動化免疫測定中，標記物通常為分子量較大的酶或熒光素，而不是放免中的小分子放射性核素，酶或熒光素標記的抗原反應速率與樣本中的抗原是不一樣的，溫育時間短，則難于達到結合反應的平衡。因此，雖然直接的非放射性核素測定操作簡單、測定精密度好，但準確度常容易出現問題。

    可的松（cortis01）在血清和尿液中常以相對較高的濃度存在，雖然這可以使測定較為容易，但不同的試驗得到的結果差異很大。一般來說血清可的松的測定較實際為高，zui可能的原因是血清中可的松結合蛋白的干擾所致。試劑廠家使用各種封閉試劑將可的松從可的松結合球蛋白（CBG）中分離出來，但究竟使用的是什么封閉試劑及是否*排除了結合蛋白的影響，廠家通常沒有明確告知。尿液中含有大量的類固醇代謝物和干擾可的松測定的耦合物，因此，大多數試驗要求在測定前必須將可的松提取出來，即使如此，也不能保證測定的準確度是可以接受的。有比較研究表明尿可的松免疫測定的值較實際值高2倍。

    雌二醇（oestradi01）的測定在臨床上有不同的目的，從而所要求測定方法的特性也有所不同。用于排卵誘導的監測則要求一個約為0．1～15nmol／L大的濃度測定范圍，而且由于測定結果用來指導治療時間是以天為基礎的，因此，要求測定時間快速。故而雌二醇的測定幾乎都用直接測定方法，普遍使用自動化分析儀。雌二醇測定在評價女孩子的青春期發育和絕經期婦女的卵巢功能中也很重要。在青春前期的女孩子中雌二醇水平低于大多數測定方法的測定下限，即20～30pmol／L，絕經期婦女雌二醇水平則低于100～llOpmol／L。某些直接測定方法宣稱其測定下限可達上述測定范圍，但這需用臨床樣本證實。

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