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微量加樣器(移液器)的具體操作方法
(一)設定容量值
Pipetman P加樣器容量計讀數由三位數字組成(顯示所轉移液體容量),讀數到個
位數。Eppendorf Research加樣器容量計讀數則由四位數字組成,讀數到小數后一位,從上(zui大有效數字)到下(zui小有效數字)讀取。利用底部刻度可將容量調節到更的分度。Pipetman P根據型號不同,數字可能是黑色或紅色的。Eppendorf Research加樣器的數字不同型號均為白色。
轉動加樣器的黑色調節環或按鈕的白色調節旋鈕均可設定容量。用白色調節旋鈕設定容量比較方便和快速,尤其是穿戴手套時。使用黑色調節環可較準確調節到設定值。
(二)吸液
首先選擇一支合適的吸頭安放在加樣器套筒上。使用P5000及P10ML時,裝吸頭前必在套筒上加插一過濾芯。稍加扭轉壓緊吸頭使之與套筒間無空氣間隙。未裝吸頭的加樣器絕不可用來吸取任何液體。
標準吸液步驟如下:
1.把按鈕壓至*停點。
2.垂直握持加樣器,使吸頭浸入液樣中,浸入液體深度視型號而定。
3.緩慢、平穩地松開按鈕,吸液樣。等1s,然后將吸頭提離液面。用藥用吸紙抹去吸嘴外面可能附著的液滴。小心勿觸及吸頭口。
(三)放液
1.將吸頭口貼到容器內壁并保持100~400傾斜 2.平穩地把按鈕壓到*停點。等1s后再把按鈕壓至第二停點以排出剩余液體。
3.壓住按鈕,同時提起加樣器,使吸頭貼容器壁擦過。
4.松開按鈕。
5.按吸頭彈射器除去吸頭(只有改用不同液體時才需更換吸頭)。
(四)預洗
當裝上一個新吸頭(或改變吸取的容量值)時應預洗吸頭,先吸人1次液樣并將之排回原容器中。
預洗新吸頭能有效提高移液的度和重現性。這是因為*次吸取的液體會在吸頭內壁形成液膜,導致計量誤差。而同一吸頭在連續操作時液膜相對保持不變,故第2次吸液時誤差即可消除。
(五)致密及黏稠液體
對于密度低于水的液體,可將容量計的讀數調到低于所需值來進行補償。
例如:用P20移液器轉移10/11血清。先將讀數調到10//1,吸取后以重量法測定。如實測體積為9.5/1l,即偏差0.5/11,則將讀數調到10.5Pl并重復1次。如第2次測定仍不夠準確,根據偏差再作調整。
排放致密或黏稠液體時,宜在*停點多等1~2s再壓到第二停點。
對密度高、黏稠大或揮發性的液體,推薦使用活塞正移動加樣器。
(六)加樣器吸頭
加樣器吸頭是整個移液系統的有機組成部分,對其基本要求是,必須有高機械、熱力學和化學穩定性,且純度高,生產過程純凈,無有機或化學物質(如染料)和重金屬污染。選擇密封良好的環口、薄壁和嘴口尖細的吸頭,將使得在加樣時,吸頭的安裝或卸脫更加容易。吸頭管壁有彈性,加樣吸液時不會產生漩渦,這樣加樣的精度就更高。吸頭嘴口無毛刺,表面光潔平滑,使得其沾濕性極小,可避免液體滯留外壁引起的誤差。吸頭應與加樣器上吸頭套筒密封完好,可防止由于空氣泄漏而造成加樣精度或準確度的誤差。此外,吸頭還應有液體容積刻度線。D200吸頭在20/1l和100~1處有標記;D1000吸頭在300~1處有標記,D10吸頭在2/A1處有標記。zui后,吸頭應可在121℃下消毒20min。
如果在使用加樣器加樣中,想避免樣品與樣品、樣品與加樣器或樣品與操作人員之間的污染,建議使用Diamond帶濾芯吸頭。Diamond帶濾芯吸頭可以經高溫消毒,其內置濾芯不會損壞。
(七)注意事項
實驗室基本上以使用連續可調的加樣器為主。連續可調式加樣器在使用時應注意以下幾點,從而使加樣器能發揮*性能。
1.取液之前,所取液體應在室溫(15—25℃)平衡。
2.操作時要慢和穩。
3.連續可調式加樣器在取樣加樣過程中應注意移液吸頭不能觸及其他物品,以免被污染;移液吸頭盒(架子)、廢液瓶、所取試劑及加樣的樣品管應擺放合理,以方便操作過程、避免污染為原則。
4.連續可調式加樣器在使用完畢后應置于加樣器架上,遠離潮濕及腐蝕性物質。
5.吸頭浸入液體深度要合適,吸液過程盡量保持不變。
6.改吸不同液體、樣品或試劑前要換新吸頭。
7.發現吸頭內有殘液時必須更換。
8.新吸頭使用前應先預測。
9.為防止液體進入加樣器套筒內,必須注意以下幾點:
①壓放按鈕時保持平穩;
②加樣器不得倒轉;
③吸頭中有液體時不可將加樣器平放;
④P5000及P10ML加樣器一定要加濾芯。
10.勿用油脂等潤滑活塞或密封圈。
11.不可把容量計數調超其適用范圍。
12.液體溫度與室溫有異時,將吸頭預洗多次再用。
13.移液溫度不得超過70℃。
14.使用了酸或有腐蝕蒸氣的溶液后,拆下套筒,用蒸餾水清洗活塞及密封圈。
15.連續可調式加樣器在使用完畢后應置于加樣器架上,遠離潮濕及腐蝕性物質。
(八)故障排除
工作中如發現加樣器漏氣或計量不準,其可能原因及解決方法為:
1.套筒螺帽松動 用手擰緊螺帽。
2.套筒刮花或破裂 卸下彈射器,檢查套筒。P2,P10或P20加樣器套筒破損時,活塞也可能變形。安裝套筒時應用手擰緊螺帽。
3.活塞或密封受化學腐蝕 更換活塞和密封圈。用蒸餾水洗滌套筒內壁。
發現套筒內有液體,可依下法清潔:卸下彈射器,擰下螺帽并用蒸餾水洗滌套筒、活塞、密封圈及O形環,待*干燥后重新組裝。
發現P5000及P10ML濾芯變濕必須更換。
需要時,可將套筒、螺帽和彈射器在121~C消毒20rain。注意密封圈及O形環不能高溫消毒。
4.發現吸液時有氣泡
①將液體排回原容器;
②檢查吸頭浸入液體是否合適;
③更慢地吸人液體,如仍有氣泡應更換吸頭。
凡是更換了活塞或操作桿的加樣器需進行全面調校。
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