PCR檢測血中HBV DNA是判斷乙肝zui可靠的方法

    血中HBV DNA的存在是HBV感染zui為直接，zui為靈敏和zui為特異的指標。HBV DNA檢測方法目前在國內使用zui廣的是聚合酶鏈反應（PCR）。使用PCR檢測血中HBV DNA，其臨床診療價值主要有：

    1．急性HBV感染的診斷。當機體感染HBV時，在外周血中HBVDNA的出現要早于其他血清學抗原抗體指標，并且只有HBVDNA存在才會引起感染，因此使用極為靈敏特異的PCR方法檢測HBVDNA可為急性HBV感染提供直接證據。

    2．可用于篩選獻血員，監測血制品的傳染性和血源性乙肝疫苗的安全性。

    3．HBVDNAPCR檢測結果與血清免疫學檢測結果的綜合評價。乙肝“兩對半”或乙肝“六項”（“兩對半”加上抗HBc-IgM）的ELISA檢測，是臨床實驗室zui常用來檢測乙肝的方法，如何看待其檢測結果與HBVDNA檢測結果之間的關系，是臨床醫師以及患者zui為關心的問題，關系到臨床治療方案的確定。

    （1）與HBsAg檢測結果的關系：在實踐中，常遇到的問題是HBsAg ELISA測定結果與HBVDNA檢測結果之間的不一致，有兩種情況：一是HBsAg陰性而HBV DNA PCR測定陽性；二是HBsAg陽性但HBVDNA陰性。前者可能是因為HBsAgELISA測定敏感性低，對極低濃度的HBsAg測不出，而PCR具有*的靈敏度，HBVDNA含量即使很低（甚至低至數個分子），亦可檢測出來；或HBsAg確已消失，但HBVDNA仍持續存在，病毒仍處于低水平復制狀態；再有，就是“a”抗原決定簇是HBV中和抗體作用的靶位，其相應的編碼基因發生變異，則無法用常規的雙抗體（抗HBs）夾心ELISA方法檢出HBsAg，變異病毒株則可以逃避機體的免疫監視而持續存在，表現為HBsAg陰性，而HBVDNA陽性。此外，在HBV初期感染時，也可能是有HBV DNA而無HBsAg。HBVDNA陰性才是HBV消除的明確指標。HBsAg陽性而HBVDNA陰性其原因一為血中BVDNA雖然存在，但是在特定的PCR檢測方法的下限以下，如有的PCR試劑靈敏度差，檢測HBVDNA的下限僅至1 000或100個拷貝。第二種可能為血中存在的HBsAg是由HBVDNA整合到人染色體與宿主基因共同表達所致，所以測不到血清中病毒DNA。通常，HBsAg陽性血清，PCR檢測HBVDNA的陽性率約為96％。肝組織活檢樣本HBVDNAPCR檢測陽性率為100％。

    （2）與抗HBs的關系：HBV感染后至恢復期抗HBs陽性，血清HBVDNAPCR檢測一般為陰性，少部分亦可為陽性，但肝組織HBVDNAPCR陽性率仍可高達77．3％．說明HBV仍存在于肝臟中。

    （3）與HBeAg，抗HBe和抗HBc的關系：HBeAg陽性血清，HBVDNAPCR檢測幾乎全為陽性，并且大部分（超過60％）含量大于10⁷拷貝／m1；HBeAg陰性而抗HBe陽性者，絕大部分HBVDNA含量小于10³拷貝／ml，但仍有少部分（約10％）大于10⁷拷貝／ml；在HBsAg陽性和抗HBc陽性者中，有將近一半其血清HBVDNA含量大于10³拷貝／ml，約1／3大于10⁷拷貝／m1。慢性乙肝患者外周單個核細胞中HBVDNAPCR檢測陽性率較高，是乙肝復發的一個主要原因。上述表明，血清HBeAg陰性和抗HBe陽性，說明病毒復制減弱，血中HBVDNA減少，但并未*消失，并且少部分患者的HBVDNA含量還可能較高，因此，僅依靠抗原抗體檢測，難以判斷病毒復制的程度及傳染性強弱，PCR檢測HBVDNA應是評價傳染性的zui可靠的方法。

    4．治療效果和抗病毒藥物的療效評價。HBV DNA檢測是乙肝病毒抗病毒治療惟一有效的監測指標，目前國內用于HBVDNA定量測定的方法基本上為聚合酶鏈反應（PCR），并以外標準作為定量依據。在臨床檢驗中，任何一種臨床檢驗方法對同一份病人標本在不同的測定批次，檢測某種指標均有一定的結果差異，不可能*一樣，就像打靶一樣，同一個人用同一支槍，槍再準，人素質再高，也是這次打10環，下次就是9．5環，再次又是10．2環，再或又是10環或只有9環。每次差異的多少跟槍和人有很大關系，像奧運會*，每槍間的環數差異就小，像普通人，則差異就很大。臨床檢驗也是如此。PCR用于HBVDNA定量檢測，如是使用外部標準進行定量，再加上HBVDNA定量數值大，通常不同測定次間差異會較通常的檢驗項目大，一般量值變化在一個數量級內均可視為沒有變化，因此，當一個HBV DNA PCR定量檢驗結果為7．2E+08拷貝／ml的乙肝患者，在抗病毒藥物如拉米夫啶或干擾素治療，2周后，再檢測，如結果為5．2E+08拷貝／ml，再2周后，結果為9．0E+08拷貝／ml，結果在一個數量級范圍內變化，說明結果沒有變化，抗病毒治療無效果。7．2E+08為7．2X10⁸的意思。

    乙肝病毒的抗病毒治療效果的判斷可以采用PCR方法動態檢測患者血循環中HBV DNA，當患者經抗病毒藥物治療后，HBVDNA含量持續下降，然后維持在低水平，或低至方法能檢出的含量（測定下限）以下，則說明治療有效。觀察抗病毒藥物治療效果不能憑二三次檢測結果來判斷，必須多次動態觀察，每次檢測的間隔日數不宜太短，一般為2周左右。因為到目前為止，人類對于病毒直到現在仍沒有找到有效的殺滅方法，只能是用抑制病毒的藥物如拉米夫定等治療。而HBV一旦感染機體，即體內將終生攜帶該病毒，不可能出現所謂的“轉陰”，使用PCR沒有檢出來，只是說明血液中病毒的含量低于所用方法能檢出的量而已。

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