人流行性乙腦IgM抗體（JE IgM）ELISA試劑盒使用說明書

                            本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）酶聯免疫分析試劑盒

使用目的：

    本試劑盒定性測定人血液、或其它相關組織中流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）

實驗原理：

    本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中人流行性乙腦IgM 抗體（JE

IgM）。用純化的流行性乙腦IgM  抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中人流行性乙

腦IgM 抗體（JE   IgM）相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP 標記的流行

性乙腦IgM 抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。

TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm

波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF 值相比較，從而判定標本中人流行性乙腦IgM 抗

體（JE IgM）的存在與否。

試劑盒組成：

  1   20 倍濃縮洗滌液         50ml×1 瓶  7      終止液                      6ml×1 瓶

  2   酶標試劑              6ml×1/瓶      8   標準品（陽性對照）                0.5ml×1 瓶

  3   酶標包被板             12 孔×8 條  9      標準品稀釋液（陰性對照） 0.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液             6ml×1 瓶      10  說明書                      1 份

  5   顯色劑A 液            6ml×1 瓶      11  封板膜                      2 張

  6   顯色劑B 液            6ml×1 瓶      12  密封袋                      1 個

標本要求：

    1．標本處理：血清、血漿標本可直接檢測

    2．標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測，可將標本在-20℃保存一個月，

       但應避免反復凍融。

    3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。

操作步驟：

1.  編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1

    孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.  加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照（標準品）50μl。然后在待測

    樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，

    盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至1000ml 后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

    重復5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.  溫育：操作同3。
8.  洗滌：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

    15分鐘

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止

    液后15 分鐘以內進行。

結果判定：

    試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;  陰性對照平均值≤0.10

    臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

    陰性判定：樣品OD 值<          臨界值（CUT OFF）者為人流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）陰性

    陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）陽性

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

   用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M  的硫酸，使用時必須

   注意安全。

規格：

     96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月

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