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簡單介紹一下，核酸濃度測量的230、260、280
點擊次數：18887 發布時間：2022-1-18
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關于核酸濃度測量的230、260、280：
在核酸、蛋白濃度檢測過程中，230nm、260nm、280nm這幾個數值經常會出現，那這幾個數值代表什么？他們之間的*優關系又是什么呢？
數值的意義：
230nm：碳水化合物*高吸收峰的吸收波長，與A260的比值可進行核酸樣品純度評估。A230產生負值可能是由于在低核酸濃度的樣液中存在一些干擾成分。
260nm：核酸*高吸收峰的吸收波長，其吸收紫外光的性質是嘌呤環和嘧啶環的共軛雙鍵系統所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它們的物質，不論是核苷、核苷酸或核酸在260nm處都會一個*高吸收峰。
280nm：蛋白質由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光，通常蛋白質的吸收高峰在280nm波長處。其與260nm處的吸光度比值，經常被用于判斷核酸樣品的純度。
除了這三個常見的波長外，在核酸檢測過程中340nm往往會被用來檢測樣品緩沖液的濁度和其他干擾因子。該值應該接近0.0，如果不是，表明溶液中有懸浮物。
圖為 核酸、蛋白質吸光度譜
比值的意義：
260/230、260/280
純度好的DNA或RNA，在pH7-8.5下：
A260 / A280比值應大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。
如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。
較純凈的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之間。
比值降低往往是樣品中存在一些污染物，如碳水化合物、鹽（胍鹽）等。
但實際樣品情況往往要相對復雜，如《分子克隆實驗指南》(第三版)所述，當 0.5％BSA蛋白質污染時，A260和A280的數值都下降，其結果是260/280的比值略微下降。但同時，蛋白殘留會導致A230的數值明顯上升，進而顯著影響260/230的比值。也就是說，如果樣品的260/280比值略低于標準值，但260 /230下降明顯，那么就應該考慮污染原因是蛋白殘留，而不是胍鹽殘留。
酚的*大吸收峰在270nm。酚的殘留會增加A230、A260和A280的數值，同時酚的吸收峰與核酸的吸收峰合并后，*大吸收峰會出現在270nm附近。因此當樣品*大吸收峰會出現在270nm附近，且260/280=1~1.5, 260/230=1~1.5，那么污染原因就應該考慮是酚殘留。
胍鹽會在小于230nm處產生大的吸收峰，進而顯著影響260/230比值，但胍鹽殘留不會影響A260、A280的數值，以及260/280的比值。也就是說，如果核酸樣品的260/280符合要求，但260/230<1，那么污染原因就應該考慮是胍鹽殘留。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關于核酸濃度測量的230、260、280。
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