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微量分光光度計原理及應用介紹
點擊次數：2183 發布時間：2021-6-26
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關于微量分光光度計原理及應用介紹：
微量分光光度計能夠快速準確的定量檢測核酸、蛋白質等溶液。具有使用方便、消耗樣品少(僅2μl)、不用預熱、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置、樣品不需要稀釋等特點，常用于核酸，蛋白定量以及生長濃度的定量，目前已成為眾多實驗室的常規儀器。
工作原理
超微量分光光度計進行濃度測定的原理是根據朗伯-比爾（Lamber-Beer）定律，
A＝K·C·L
式中，A為吸光度；K為吸（消）光系數；C為溶液的濃度；L為液層厚度。此公式說明：在入射光一定時，溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數學表達式，又叫朗伯-比爾定律。
核酸定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率高的功能。可以定量測定溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵，具有紫外吸收的特性，大的吸收波長在260nm，吸收波谷在230nm。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
蛋白質直接定量
這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。蛋白質直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單；但是容易受到平行物質的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質定量
蛋白質通常是多種蛋白質的化合物，比色法測定的基礎是蛋白質構成成分：氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團或者染料反應，產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關，從而反應蛋白質濃度。
比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等幾種方法。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關于微量分光光度計原理及應用介紹。
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