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蛋白和核酸不一樣,具有很強的多樣性。Protein A280功能應用于檢測那些含有Trp、Tyr殘基或者含有Cys-Cys二硫鍵的純蛋白,這些蛋白在280nm吸光度明顯。本機方法不需要構建標準曲線,而是檢測吸光度后,直接計算蛋白濃度。
Protein A280顯示紫外吸收光譜,檢測280nm處的吸光度后計算濃度(mg/ml)。和核酸檢測一樣,Protein A280記錄顯示的是10mm光程下的數據。
Nano-600在基座模式下可以多檢測90mg/ml的BSA而不用稀釋。
當檢測樣品的吸光后的光強小于200時(10mm光程下),軟件會提示用戶選擇更小的測量光程,以保證測試的準確性。
決定液體表面張力的主要因素是溶液中水分子之間的氫鍵,通常情況下,水中的物質,如蛋白、鹽離子、去污劑等都會通過破壞水分子之間的氫鍵來減小表面張力。雖然對于大部分樣品來說,1ul的量就足夠用于檢測了,但由于表面張力下降,我們建議使用2ul的量以保證形成液柱。
可選擇或取消基線校準。蛋白檢測默認的基線校準波長為340nm,用戶可根據試驗需要輸入不同的校準波長。在任何情況下,基線都自動設定為選擇波長下的吸光度,所有波長的吸光度讀數都是減去這個值的結果。
注意:基線校準必須在進行樣品檢測之前設定,樣品檢測之后設定無效。不選擇基線校準,光譜值將會產生偏移,計算的濃度也會改變。
⑵操作步驟:
①設定項目名稱和樣品編號與蛋白類型;
②使用緩沖液建立空白對照:取2ul空白溶液加到下基座上,放下上基座并點擊“空白";
③使用干凈無塵布把基座上的空白溶液擦干凈;
④取2ul樣品滴加到下基座上,放下上基座,點擊“樣品"進行檢測;
注意:每次檢測的樣品都必須是剛加入的。
⑤檢測完成后,必須用干凈的無塵布擦掉上下基座上的樣品,才可以檢測下一個樣品。
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