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各種動(dòng)物或人外周血造血干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液操作說明和使用及保存中的注意事項(xiàng):
本品為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是Ficoll 400 與泛影酸葡甲胺。適用于從組織勻漿中(胎牛血清或人血清懸起的勻漿細(xì)胞 1X107/ml)分離所需細(xì)胞,在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。
其他人及動(dòng)物多種比重細(xì)胞分離液。注:因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同,所以用戶在定制分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物的種屬及被分離細(xì)胞的名稱。
使用方法:
1,例:取1ml肝素抗凝血與全血及組織勻漿稀釋液(或胎牛血清或人血清懸起勻漿的細(xì)胞 1X108/ml)1:1混合再與1ml的干細(xì)胞重懸液(產(chǎn)品編號(hào):TBD2012SCB)混勻置20度下自然沉降20-30分鐘。吸取渾濁的上清部分,棄去底部紅細(xì)胞備用。(使用本干細(xì)胞重懸液可zui終可獲得全血中約2%干細(xì)胞,若省去重懸步驟則只可獲得小于2%的干細(xì)胞。)
2,用吸取渾濁的上清部分液體小心疊加在本分離液之液面上(比例為1:1),20度400g/分鐘,離心20分鐘(水平轉(zhuǎn)子),此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。
*層:為血漿或組織勻漿液層。
第二層:為環(huán)狀乳白色含所需干細(xì)胞。
第三層:為透明分離液層。
第四層;為極少紅細(xì)胞層,收集第二層細(xì)胞放入含細(xì)胞洗滌液(Cat#:2010X1118)4-5毫升的試管中,充分混勻后,以1500-2000轉(zhuǎn)/分離心10-30分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗2次即得所需干細(xì)胞。(此方法效果較好,推薦使用)
分離圖例:
注意事項(xiàng)
1. 啟封后應(yīng)置4℃保存避免微生物的污染。
2. 細(xì)胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,需待溶液溫度升至室溫時(shí),搖勻后使用。
3. 整個(gè)分離過程中,溫度應(yīng)控制在18-28℃且在無菌環(huán)境下,避免微生物的污染,否則會(huì)影響分離質(zhì)量。
應(yīng)用
-從動(dòng)物組織中分離所需細(xì)胞
特點(diǎn)
-密度變化率依照Ficoll 400,泛影酸和氫氧化鈉.
-*分離溶液的密度為參照具體產(chǎn)品的標(biāo)簽
-生理學(xué)參數(shù)
-在低粘度時(shí)高密度
-無菌-即用型-溶液
產(chǎn)品質(zhì)控
溶液 注射用水
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 <5EU/ml
無菌 已檢測
保存期限 2年
注意
TBD實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞分離培養(yǎng)基是敏光型的。這種培養(yǎng)基在運(yùn)輸和貯藏過程中應(yīng)避光保溫。由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時(shí)間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定)。組織,血液,細(xì)胞要求新鮮,避免冷凍和冷藏。
貯藏
18-25℃避光保存。啟封后置4℃保存。本品為真空包裝,未啟封前置于10℃以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
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