2020年6月19日，激光共聚焦新品STELLARIS上市（上海站）暨華東區用戶交流會在中國科學院上海學術交流中心隆重召開。在眾多方法學并存的今天，以影像科學為基礎的科學研究迸發出蓬勃生機。本次會議圍繞顯微技術在基礎醫學、臨床醫學、植物學等多學科中的應用成果展開討論，并實操體驗STELLARIS和THUNDER系列產品在諸多研究領域的應用。
開幕式上，生命科學市場經理李偉晶對各位專家的蒞臨表示了歡迎，回顧歷史，徠卡始終秉持以前沿科技為導向，實現應用轉化，以助力用戶推動科學發展。應用團隊為STELLARIS揭開神秘面紗，向與會的專家們介紹了產品的性能與應用，并通過分組操作的方式讓專家們親身感受革命性升級帶來的全新體驗。
▲應用團隊為STELLARIS揭幕
▲與會人員上機感受STELLARIS
會上諸多徠卡的資深用戶分享了自己的研究成果與心得體會，我們一起來回顧下吧。
講題一：血腦屏障胞轉機制管狀結構的超分辨研究
報告人：田肖和 安徽大學生命科學學院
田教授介紹了課題組通過熒光納米探針揭示血腦屏障胞轉機制。從納米顆粒的制備到表面修飾分子Angiopep2濃度的優化，從生物物理學模型分析到“三明治樣”3D細胞模型的設計，每一個環節都建立在穩定的實驗平臺基礎上。研究人員發現大分子透過血腦屏障的轉運受到受體濃度的調節，且需Syndepin II的協助才能高效完成。田教授利用Leica共聚焦的共振掃描技術初步驗證了這一假說，利用4D STED技術進一步捕捉到分子通過血腦屏障的實時超分辨影像學信息，并分享了他在STED熒光染料優化環節上的寶貴經驗，向我們展示了高水平的神經生物學和納米示蹤技術的超分辨研究。
▲田教授分享其在STED熒光染料優化環節上的寶貴經驗
講題二：體外細胞微環境重構及生物學行為研究
報告人：劉妍君 復旦大學生物醫學研究院
劉教授課題組結合微流控技術及分析化學的方法，重構體內細胞微環境，研究細胞運動、遷移等生命現象。通過與Leica合作共同搭建的全自動活細胞動態跟蹤影像平臺，實驗者可輕松追蹤長達數天的活細胞行為，并能保證長時間成像過程中焦面的穩定及細胞的活性。研究者發現細胞在體外重構的不同微環境中可在EMT與Amoeba運動間靈活切換，這為體內腫瘤細胞轉移及侵襲機制的研究提供了新思路，有望為腫瘤精準治療提供新方向。
▲劉教授分享其實驗平臺
講題三：FLIM在無標記癌癥診斷和納米材料中的應用
報告人：糜蘭 復旦大學光科學與工程系
FLIM技術具有對微環境的PH值、蛋白結合態、氧、鈣離子濃度等敏感，不受樣品濃度、激發光強度、光漂白等的影響等特點。研究人員發現由于代謝的不同，癌變區域的自發熒光壽命比較短。在常規腫瘤病理診斷中組織化學石蠟切片需要7天，冰凍切片HE染色需要30min，而FLIM方法只需要2~3min。在對肺癌與宮頸癌患者的樣本分析中發現，熒光壽命的差異具有統計學意義，且能在組織發生可觀測形變前對腫瘤進行早期診斷。
▲FLIM成像下，腫瘤組織的自發熒光壽命短于正常組織，正常組織、移行區和癌變區的邊界明顯
此外，FLIM還可用于細胞內PH探測。細胞內pH對細胞增殖、凋亡、離子轉運、內吞、腫瘤生長等至關重要，異常的pH與腫瘤、阿爾茨海默癥等相關。pH傳感CDs納米粒子，在不同PH值溶液中，不僅熒光亮度變化，熒光壽命也會變化，而且更加線性，更加穩定。能應用在活細胞中，與其他熒光染料共染。
▲CDs在活細胞中的FLIM成像
講題四：FLIM-FRET技術驗證植物自噬相關蛋白互作
報告人：管彬 中科院分子植物創新中心
煙草表皮細胞中瞬時表達細胞自噬相關膜蛋白X-GFP和Y-mCherry，研究人員利用門控技術有效去除煙草細胞壁的自發熒光和雜散光。在只表達X-GFP和表達free-GFP/Y-mCherry的對照組中測得Donor GFP的的熒光壽命為2.75ns左右，而在同時表達X-GFP和Y-mCherry的實驗組中測得GFP的熒光壽命下降至2.6ns左右，統計學分析顯示X蛋白與Y蛋白有顯著的FRET現象。
講題五：多功能熒光聚合物納米探針用于淋巴管系統結構與功能的多尺度多模態成像
報告人：熊麗琴 上海交通大學
淋巴管與腫瘤的復發轉移息息相關，但目前對其生理過程研究較少。熊教授構建了性能穩定、更快速的淋巴管靶向顯影及載藥的多功能納米探針，標記小鼠淋巴系統，再利用Leica多光子、高分辨、大深度成像系統觀察，發展了淋巴管系統活體高分辨成像的新方法。該方法實現了術中快速成像，準確定位，區別正常淋巴結與腫瘤浸潤淋巴結的位置，幫助醫生精準手術切除，而無需淋巴結清掃，減少手術并發癥，提高患者生活質量。
▲熊老師為大家帶來精彩報告
講題六：STED揭示了纖毛中央微管的形成機制
報告人：劉浩 中國科學院分子細胞科學創新中心
纖毛的運動對很多器官正常生理功能起重要作用，而中央微管是纖毛運動的重要組成部分。研究發現Wdr47蛋白表達會隨著纖毛生長而遞增，同時Wdr47蛋白會在肺和腦等多纖毛組織器官中高表達。為了研究Wdr47蛋白在纖毛中扮演的角色，使用Leica STED超高分辨成像技術觀察Wdr47蛋白在纖毛中的定位。結果顯示，STED技術可以有效分辨Wdr47在微管上的定位情況，同時，Wdr47與中央微管有很好的共定位。
此次會議內容精彩紛呈，氣氛熱烈活潑，與會人員收獲滿滿，一天的會議時長尤嫌不足。期待疫情早日結束，下一站的會議可以與更多老師相聚，為大家帶來更多的前沿分享。
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