高內涵篩選(high content screening, HCS)技術,指在保持細胞結構和功能完整性的前提下檢測被篩樣品,分析其對細胞形態、生長、分化、遷移、凋亡、代謝途徑及信號轉導等各個環節的影響,在單一實驗中獲取大量與基因、蛋白及其他細胞成分相關的信息,從而實現對化合物多靶點、多參數的同時檢測,確定其生物活性和潛在毒性的過程。這種量化的方法適用于大規模藥物篩選、藥理毒理實驗等等。以往在獲取細胞圖像時,由于被測樣品量大,而顯微鏡檢測視野小、操作繁瑣,檢測一張96孔板需要幾個小時的時間,難以滿足實驗需求。今天我們以24孔板為例為大家演示如何利用THUNDER實現高內涵快速掃描成像。
首先設定好紅綠雙色通道和曝光時間,選擇適合高內涵快速成像的ICC THUNDER方法,然后進入LAS X Navigator導航式界面。
然后點擊carrier,去選擇對應孔板的模具,那這邊我們選擇24孔板即可出現對應畫面。
那比如我們想在每個孔中做隨機10個點的多點掃描,點擊ok可出現10個位置固定的模式。
那如果想要10個點的位置不一樣,我們可以勾選random,這樣10個點的位置是隨機的。
此外,我們還可以調整點的分布,讓其更靠近中心或邊緣。比如,更靠中心一些,ok,那這樣可以看到10個點更聚集在孔的中央。
或者,我們還可以進行拼圖,比如,做一個5X5的拼圖,這樣可以看到每個孔中有一個5X5視野的拼圖。
或者可以以孔的覆蓋度來進行拼圖。比如我們選擇60%的覆蓋度,可以看到是這個樣子。
這里以5X5拼圖為例,可以看到右下角24個孔拍完總共需要的時間和數據大小。
設置完成后,點擊start進行拍攝。拍攝完成之后,可通過鼠標滾輪對每個孔的拼圖進行放大查看,也可以對任意一個孔的圖像進行查看。圖像清晰、無拼接痕跡。
以上多孔板高內涵快速成像的操作就完成了。
在操作視頻里,我們可見THUNDER可隨心所欲地控制多孔板高內涵快速成像;直觀又準確無誤的操作讓您用非常少的投入便實現從圖像采集到創建報告;從此,您無需在學習軟件操作上花費大量的精力,將更多的時間投入到研究中!
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